細(xì)胞培養(yǎng)基類(lèi)型及特點(diǎn)（細(xì)胞培養(yǎng)第一更） - 知乎首發(fā)于那些值得一直學(xué)習(xí)的點(diǎn)滴切換模式寫(xiě)文章登錄/注冊(cè)細(xì)胞培養(yǎng)基類(lèi)型及特點(diǎn)（細(xì)胞培養(yǎng)第一更）瞬間de回眸基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)在讀研究僧培養(yǎng)基種類(lèi)經(jīng)典的培養(yǎng)基有很多種，其中 DMEM、 RPMI 1640、 MEM 、 DMEM/F12 都是應(yīng)用最廣泛的培養(yǎng)基。其他 如 M199 、 IMDM 、 L15培養(yǎng)基等也用于某些細(xì)胞的培養(yǎng)。其具體的特征及應(yīng)用如下：1、BME細(xì)胞培養(yǎng)基基礎(chǔ) Eagle 培養(yǎng)基 (BME) 是一種廣泛使用的合成基礎(chǔ)培養(yǎng)基，可支持很多種類(lèi)的哺乳動(dòng)物細(xì)胞生長(zhǎng)。BME 最初1955年由 Harry Eagle 針對(duì) HeLa 細(xì)胞和小鼠成纖維細(xì)胞開(kāi)發(fā)，其發(fā)現(xiàn)了體外細(xì)胞生長(zhǎng)的最低要求。此后 BME 已用于其他人細(xì)胞系，包括 WI-38 和 MRC-5。BME 含有八種 B 族維生素、十種必需氨基酸以及胱氨酸、酪氨酸和谷氨酰胺以及酚紅，不含有L-谷氨酰胺和HEPES。BME 不含蛋白、脂質(zhì)或生長(zhǎng)因子。因此，BME 需要補(bǔ)充營(yíng)養(yǎng)成分，通常需要添加 10% 胎牛血清 (FBS)。BME 使用碳酸氫鈉緩沖系統(tǒng) (2.2 g/L)，因此需要 5-10% CO2 環(huán)境來(lái)維持生理 pH 值。在此基礎(chǔ)上改良的細(xì)胞培養(yǎng)基品種有MEM、DMEM、IMDM等。2、MEM細(xì)胞培養(yǎng)基MEM (Minimum Essential Medium) 又稱低限量Eagle培養(yǎng)基，1959年在Eagle's基礎(chǔ)培養(yǎng)基（BME）上修改而來(lái)，刪去賴氨酸、生物素，是一種較為常用的細(xì)胞培養(yǎng)基。MEM 可用于各種懸浮和貼壁的哺乳動(dòng)物細(xì)胞的培養(yǎng)，包括 HeLa、BHK-21、293、HEP-2、HT-1080、MCF-7、成纖維細(xì)胞和原代大鼠星形膠質(zhì)細(xì)胞等。 Harry Eagle此后對(duì) MEM 進(jìn)行了許多其他改良，包括 Glasgow’s MEM、MEM α、DMEM 以及 Temin’s 改良培養(yǎng)基。MEM 含有 Earle’s 平衡鹽用于 CO2 培養(yǎng)箱，或含有 Hanks' 平衡鹽用于無(wú) CO2 培養(yǎng)箱。3、DMEM細(xì)胞培養(yǎng)基DMEM (Dulbecco's Modified Eagle Medium)是由Dulbecco改良的Eagle培養(yǎng)基，是一種廣泛使用的基礎(chǔ)培養(yǎng)基，可用于支持很多種類(lèi)的哺乳動(dòng)物細(xì)胞生長(zhǎng)。已經(jīng)在 DMEM 中成功培養(yǎng)出的細(xì)胞包括原代成纖維細(xì)胞、神經(jīng)元、膠質(zhì)細(xì)胞、HUVEC、平滑肌細(xì)胞，以及 HeLa、293、Cos-7 和 PC-12 等細(xì)胞系。DMEM 與其他培養(yǎng)基的不同之處在于其含有相當(dāng)于初始 Eagle 最低必需培養(yǎng)基 4 倍濃度的氨基酸和維生素。采用雙倍的HCO3-和CO2濃度起到更好的緩沖作用。DMEM 最初采用低濃度葡萄糖 (1 g/L) 和丙酮酸鈉配制，但通常在含/不含丙酮酸鈉的高糖環(huán)境下使用。后來(lái)將葡萄糖含量調(diào)整至(4.5g/L)，就是我們用的高糖DMEM。低糖適于依賴性貼壁細(xì)胞培養(yǎng)，特別適用于生長(zhǎng)速度快、附著性較差的腫瘤細(xì)胞培養(yǎng)。高糖更適合高密度懸浮細(xì)胞培養(yǎng)，也適用于附著性較差，但又不希望它脫離原來(lái)生長(zhǎng)點(diǎn)的克隆培養(yǎng)，也可用于雜交瘤中骨髓瘤細(xì)胞和DNA轉(zhuǎn)染的轉(zhuǎn)化細(xì)胞的培養(yǎng)。例如CHO細(xì)胞表達(dá)生產(chǎn)乙肝疫苗、CHO細(xì)胞表達(dá)EPO。4、IMDM細(xì)胞培養(yǎng)基IMDM（Iscove's Modified Dulbecco's Medium，Iscove 改良杜氏培養(yǎng)基）非常適用于快速增殖的高密度細(xì)胞培養(yǎng)，包括 Jurkat、COS-7 和巨噬細(xì)胞。Guilber 和Iscove將Dulbecco' Medium 改良為 Iscove's Medium，用于培養(yǎng)紅細(xì)胞和巨噬細(xì)胞前體。此種培養(yǎng)基包含硒和其他氨基酸及維生素。此外，這款獨(dú)特的培養(yǎng)基不含鐵，使用硝酸鉀取代硝酸鐵。IMDM還能夠促進(jìn)小鼠B淋巴細(xì)胞，LPS刺激的B細(xì)胞，骨髓造血細(xì)胞，T細(xì)胞和淋巴瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)。5、RPMI-1640細(xì)胞培養(yǎng)基RPMI 1640 培養(yǎng)基 (Roswell Park Memorial Institute 1640 Medium) 起初是1967年Moore等人研制，為了懸浮培養(yǎng)人白血病單層細(xì)胞而開(kāi)發(fā)的。此后，RPMI 1640 培養(yǎng)基被發(fā)現(xiàn)適用于多種哺乳動(dòng)物細(xì)胞，包括 HeLa 細(xì)胞、Jurkat 細(xì)胞、MCF-7 細(xì)胞、PC12 細(xì)胞、PBMC 細(xì)胞、星形膠質(zhì)細(xì)胞和癌細(xì)胞。RPMI 1640 培養(yǎng)基相比其他培養(yǎng)基之所以具有獨(dú)特的效果，是因?yàn)槠渲泻羞€原劑谷胱甘肽和高濃度的維生素。RPMI 1640 培養(yǎng)基含有生物素、維生素 B12 以及 PABA，這些成分是 Eagle's MEM 和 DMEM 所不具備的。此外，該培養(yǎng)基之中還含有高濃度的維生素肌醇和膽堿。RPMI-1640包含 GlutaMAX、酚紅；不包含 HEPES。6、HamF10細(xì)胞培養(yǎng)基1963年Ham設(shè)計(jì)，含微量元素，可在血清含量低時(shí)用，適用于克隆化培養(yǎng)。Ham's F-10 營(yíng)養(yǎng)培養(yǎng)基可用于無(wú)血清生長(zhǎng)的中國(guó)倉(cāng)鼠卵巢（CHO）細(xì)胞和需添加血清的多種哺乳動(dòng)物細(xì)胞系的生長(zhǎng)。7、DMEM/F12細(xì)胞培養(yǎng)基Ham's F-12 營(yíng)養(yǎng)混合物 (F-12) 設(shè)計(jì)用于中國(guó)倉(cāng)鼠卵巢 (CHO) 細(xì)胞的無(wú)血清單細(xì)胞鋪板。自此之后，F(xiàn)-12 已用于 CHO 培養(yǎng)物的無(wú)血清生長(zhǎng)以及其他哺乳動(dòng)物細(xì)胞的添加血清生長(zhǎng)，包括軟骨細(xì)胞和大鼠前列腺上皮細(xì)胞。與其他基礎(chǔ)培養(yǎng)基相比，F(xiàn)-12 含有更廣泛的成分，包括鋅、腐胺、次黃嘌呤和胸苷。F-12 不含蛋白質(zhì)或生長(zhǎng)因子。DMEM/F-12 是一種 1:1 DMEM 和 Ham's F-12 混合物。該配方將 DMEM 的高濃度葡萄糖、氨基酸及維生素與 F-12 的廣泛組分結(jié)合在一起。DMEM/F-12 (Dulbecco's Modified Eagle Medium/Nutrient Mixture F-12) 是一種廣泛使用的基礎(chǔ)培養(yǎng)基，可用于支持很多種類(lèi)的哺乳動(dòng)物細(xì)胞生長(zhǎng)。已在 DMEM/F-12 中成功培養(yǎng)的細(xì)胞包括 MDCK、膠質(zhì)細(xì)胞、成纖維細(xì)胞、人內(nèi)皮細(xì)胞及小鼠成纖維細(xì)胞。8、M199細(xì)胞培養(yǎng)基1950年Morgan等設(shè)計(jì)的具有確定化學(xué)成分的細(xì)胞培養(yǎng)液，即M-199。199 培養(yǎng)基起初開(kāi)發(fā)用于雞胚成纖維細(xì)胞的營(yíng)養(yǎng)研究。它具有廣泛的物種適用性，特別適用于非轉(zhuǎn)化細(xì)胞的培養(yǎng)。199 培養(yǎng)基廣泛用于病毒學(xué)、疫苗生產(chǎn)以及小鼠胰腺上皮和大鼠晶狀體組織原代外植體的體外培養(yǎng)。與其他基礎(chǔ)培養(yǎng)基相比，199 培養(yǎng)基含有獨(dú)特的成分，包括腺嘌呤、腺苷、次黃嘌呤、胸腺嘧啶和其他維生素。9、McCoy5A培養(yǎng)基1959年MeCoy為肉瘤細(xì)胞設(shè)計(jì)，BSS＋40種成分?？芍С侄喾N（如骨髓、皮膚、肺和脾臟等）的原代移植物的生長(zhǎng)，除適于一般的原代細(xì)胞培養(yǎng)外，主要用于作組織活檢培養(yǎng)、一些淋巴細(xì)胞培養(yǎng)以及一些難培養(yǎng)細(xì)胞的生長(zhǎng)支持。例如Jensen大鼠肉瘤成纖維細(xì)胞、人淋巴細(xì)胞、HT-29、BHL-100等上皮細(xì)胞。10、L15 細(xì)胞培養(yǎng)基Leibovitz L-15 培養(yǎng)基支持 HEP-2 猴腎臟細(xì)胞以及胚胎和成人組織的原代組織塊生長(zhǎng)。L-15 采用磷酸鹽和游離氨基酸而非碳酸氫鈉進(jìn)行緩沖。L-15培養(yǎng)液適用于快速增殖瘤細(xì)胞的培養(yǎng)，用于在CO2缺乏的情況下培養(yǎng)腫瘤細(xì)胞株。此培養(yǎng)液采用磷酸鹽緩沖體系，氨基酸組成進(jìn)一步改良，并由半乳糖替代了葡萄糖。培養(yǎng)基成分細(xì)胞培養(yǎng)基的種類(lèi)很多，按其來(lái)源分為合成培養(yǎng)基和天然培養(yǎng)基（目前使用的培養(yǎng)基絕大部分是合成培養(yǎng)基），按其物質(zhì)狀態(tài)分為干粉培養(yǎng)基和液體培養(yǎng)基兩類(lèi)。干粉培養(yǎng)基需由實(shí)驗(yàn)者自己配制并滅菌，液體培養(yǎng)基由專(zhuān)業(yè)商家提供，用戶可直接使用，非常方便。1、合成培養(yǎng)基的主要成分有：氨基酸、碳水化合物、無(wú)機(jī)鹽、維生素及其它輔助物質(zhì)：氨基酸氨基酸是組成蛋白質(zhì)的基本單位。不同種類(lèi)的細(xì)胞對(duì)氨基酸的要求各異，但有幾種氨基酸細(xì)胞自身不能合成，必須依靠培養(yǎng)液提供，這幾種氨基酸稱為必需氨基酸。其中谷氨酰胺是細(xì)胞合成核酸和蛋白質(zhì)必需的氨基酸，在缺少谷氨酰胺時(shí)，細(xì)胞生長(zhǎng)不良而死亡。因此，各種培養(yǎng)液中都有較大量的谷氨酰胺。但是，由于谷氨酰胺在溶液中很不穩(wěn)定，應(yīng)置于-20℃冰箱中保存，在使用前加入培養(yǎng)液內(nèi)。已含谷氨酰胺的培養(yǎng)液在4℃冰箱中儲(chǔ)存2 周以上時(shí)，還應(yīng)重新加入原來(lái)量的谷氨酰胺。碳水化合物碳水化合物是細(xì)胞生長(zhǎng)主要能量來(lái)源，其中有的是合成蛋白質(zhì)和核酸的成分。主要有葡萄糖、核糖、脫氧核糖、丙酮酸鈉和醋酸等。無(wú)機(jī)鹽培養(yǎng)液中無(wú)機(jī)鹽的主要功能是幫助細(xì)胞維持滲透壓平衡。此外，通過(guò)提供鈉，鉀和鈣離子，幫助細(xì)胞調(diào)節(jié)細(xì)胞膜功能。培養(yǎng)液的滲透壓是一個(gè)非常重要的因素, 細(xì)胞通?？赡褪?60mOsm/kg ～320 mOsm/kg。標(biāo)準(zhǔn)培養(yǎng)液的滲透壓在此范圍內(nèi)波動(dòng)。特別注意：向培養(yǎng)液中加入其它物質(zhì)有可能會(huì)明顯改變培養(yǎng)液的滲透壓，特別是溶于強(qiáng)酸或強(qiáng)堿中的物質(zhì)。向培養(yǎng)液中添加HEPES 時(shí)需按以下方法調(diào)節(jié)鈉離子濃度。緩沖系統(tǒng)大多數(shù)細(xì)胞所需pH 在 7.2 - 7.4。但是，細(xì)胞培養(yǎng)最適pH 值隨培養(yǎng)的細(xì)胞種類(lèi)不同而不同。成纖維細(xì)胞喜歡較高pH (7.4 - 7.7), 而傳代轉(zhuǎn)化細(xì)胞系則需要偏酸pH (7.0 - 7.4)。由于多數(shù)培養(yǎng)液靠碳酸氫鈉（NaHCO3）與CO2 體系進(jìn)行緩沖，因此，氣相中的CO2 濃度應(yīng)與培養(yǎng)液中碳酸氫鈉濃度相平衡。如果氣相或培養(yǎng)箱空氣中CO2 濃度設(shè)定在5％，培養(yǎng)液中NaHCO3 的加入量為1.97g/L；如果CO2 濃度維持在10％，培養(yǎng)液中NaHCO3 的加入量為3.95g/L。細(xì)胞培養(yǎng)瓶蓋不應(yīng)擰得太緊，以保證氣體交換。HEPES 是一種非離子緩沖液，在pH 7.2 - 7.4 范圍內(nèi)具有較好的緩沖能力，但是非常昂貴，在高濃度時(shí)對(duì)一些細(xì)胞可能有毒。HEPES 緩沖液可與低水平的碳酸鈉（0.34g/L）共用，以抵消因額外加入HEPES 引起的滲透壓增加。在這種培養(yǎng)條件下，細(xì)胞培養(yǎng)瓶的蓋子應(yīng)擰緊，以防止培養(yǎng)液中所需的少量碳酸鹽散入空氣中。大多數(shù)培養(yǎng)液中含有酚紅作為pH 指示劑，酸性培養(yǎng)液呈橙黃色，堿性培養(yǎng)液呈深紅色。維生素在細(xì)胞培養(yǎng)中，盡管血清是維生素重要來(lái)源， 但是許多培養(yǎng)基中添加了各種維生素以適合更多的細(xì)胞系生長(zhǎng)。其它成分在一些較為復(fù)雜的培養(yǎng)液中還包括其它一些成分。如在雜交瘤技術(shù)中常用的DMEM 培養(yǎng)液，使用時(shí)還需要補(bǔ)加丙酮酸鈉和2-巰基乙醇（2-Mercaptoethanol，2-Me）。2-Me 對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)有很重要的作用。有人認(rèn)為它相當(dāng)于胎牛血清，有直接刺激細(xì)胞增殖作用。2-Me的活性部分是硫氫基，其中一個(gè)重要作用是使血清中含硫的化合物還原成谷胱甘肽，能誘導(dǎo)細(xì)胞的增殖，為非特異性的激活作用。同時(shí)避免過(guò)氧化物對(duì)培養(yǎng)細(xì)胞的損害。另一個(gè)重要作用是促進(jìn)分裂原的反應(yīng)和DNA 合成，增加植物凝集素(PHA)對(duì)淋巴細(xì)胞的轉(zhuǎn)化作用，已廣泛應(yīng)用于雜交瘤技術(shù)，另外，也開(kāi)始用于一些難以培養(yǎng)的細(xì)胞。2-Me 是一種小分子還原劑，極易氧化。分子量為78.13，純的2-Me 是一種無(wú)色有刺激味的液體，比重為1.110-1.120(Do20)，常用終濃度為5×10-5M。常配制成0.1M 的儲(chǔ)存液，用時(shí)每升培養(yǎng)液加0.5ml。液體培養(yǎng)基保存：液體培養(yǎng)基應(yīng)于4℃冰箱避光保存，實(shí)驗(yàn)前放入37℃預(yù)熱。未加血清液體培養(yǎng)基有效期為12 個(gè)月。液體培養(yǎng)基中的L-谷氨酰胺會(huì)隨著儲(chǔ)存時(shí)間的延長(zhǎng)而慢慢分解。如果細(xì)胞生長(zhǎng)不良，可以再添加適量L-谷氨酰胺。發(fā)布于 2022-10-23 16:11細(xì)胞細(xì)胞培養(yǎng)生物實(shí)驗(yàn)?贊同 32??2 條評(píng)論?分享?喜歡?收藏?申請(qǐng)轉(zhuǎn)載?文章被以下專(zhuān)欄收錄那些值得一直學(xué)習(xí)的點(diǎn)滴這是一些適合學(xué)生學(xué)習(xí)，讀研等的一些亂七八糟的
全面解讀細(xì)胞培養(yǎng)基！ - 知乎首發(fā)于細(xì)胞培養(yǎng)俱樂(lè)部切換模式寫(xiě)文章登錄/注冊(cè)全面解讀細(xì)胞培養(yǎng)基！CellMax專(zhuān)注于細(xì)胞培養(yǎng)，歡迎大家來(lái)交流！1. 細(xì)胞培養(yǎng)基的種類(lèi)按照細(xì)胞培養(yǎng)基的發(fā)展歷史，細(xì)胞培養(yǎng)基大致可分為平衡鹽溶液、天然細(xì)胞培養(yǎng)基、合成細(xì)胞培養(yǎng)基、無(wú)血清細(xì)胞培養(yǎng)基、限定化學(xué)成分細(xì)胞培養(yǎng)基等幾大種類(lèi)。1.1 平衡鹽溶液（balanced salt solution，BSS）BSS主要是由無(wú)機(jī)鹽、葡萄糖組成，它的作用是維持細(xì)胞滲透壓平衡，保持pH穩(wěn)定及提供簡(jiǎn)單的營(yíng)養(yǎng)。其主要用于細(xì)胞的漂洗、配制其他試劑等。幾種常用的BSS配方如下（表1-1）。D-Hank's與Hank's的一個(gè)主要區(qū)別是前者不含有Ca2+和Mg2+，因此D-Hank's常用于配制胰酶溶液。因?yàn)镃a2+、Mg2+是細(xì)胞膜的重要組成成份，參與細(xì)胞粘附等功能，使用不含Ca2+、Mg2+的BSS可避免細(xì)胞結(jié)團(tuán)。此外，Hanks液和Earle液是常用的BSS基礎(chǔ)溶液，前者緩沖能力較弱，適合于密閉培養(yǎng)；后者緩沖能力較強(qiáng)，適合于5% CO2的培養(yǎng)條件。表1-1 幾種常用的BSS配方（g/L） 1.2 天然細(xì)胞培養(yǎng)基天然培養(yǎng)基指來(lái)自動(dòng)物體液或利用組織分離提取的一類(lèi)培養(yǎng)基，如血漿、血清、淋巴液、雞胚浸出液等。其優(yōu)點(diǎn)是營(yíng)養(yǎng)成分豐富，培養(yǎng)效果良好，但缺點(diǎn)是成分復(fù)雜，來(lái)源受限且制作過(guò)程復(fù)雜、批間差異大。目前廣泛使用的天然培養(yǎng)基是血清，另外各種組織提取液、促進(jìn)細(xì)胞貼壁的膠原類(lèi)物質(zhì)在培養(yǎng)某些特殊細(xì)胞也是必不可少。水解乳蛋白是乳白蛋白經(jīng)蛋白酶和肽酶水解的產(chǎn)物，含豐富的多肽、氨基酸和碳水化合物。一般配制成0.5 %溶液（采用平衡鹽溶液溶解）與合成培養(yǎng)基（如MEM細(xì)胞培養(yǎng)基）以1:1的比例混合使用。目前用于細(xì)胞培養(yǎng)的血清主要是牛血清，培養(yǎng)某些特殊細(xì)胞也用人血清、馬血清等。牛血清對(duì)絕大多數(shù)哺乳動(dòng)物細(xì)胞都是適合的，但并不排除在培養(yǎng)某種細(xì)胞時(shí)使用其他動(dòng)物血清更合適。血清中含有各種血漿蛋白、多肽、脂肪、碳水化合物、生長(zhǎng)因子、激素、無(wú)機(jī)物等，這些物質(zhì)對(duì)促進(jìn)細(xì)胞生長(zhǎng)或抑制生長(zhǎng)活性是達(dá)到生理平衡的。此外，血清含一些對(duì)細(xì)胞產(chǎn)生毒性的物質(zhì)，如多胺氧化酶，能與來(lái)自高度繁殖細(xì)胞的多胺反應(yīng)（如精胺、亞精胺）形成有細(xì)胞毒性作用的聚精胺。補(bǔ)體、抗體、細(xì)菌毒素等都會(huì)影響細(xì)胞生長(zhǎng)，甚至造成細(xì)胞死亡。目前，血清多作為一種添加成分與合成培養(yǎng)基混合使用，使用濃度一般為5 ~ 20 %，最常用是10 %。由于水解乳蛋白和血清成份復(fù)雜，批間差異大及存在病毒等外源污染風(fēng)險(xiǎn)，對(duì)下游生物制品的分離純化和安全性都存在較大的影響，在生物制藥行業(yè)的使用也越來(lái)越少。因此，基于對(duì)血漿成份的分析，合成細(xì)胞培養(yǎng)基應(yīng)運(yùn)而生。1.3 合成細(xì)胞培養(yǎng)基合成培養(yǎng)基是根據(jù)天然培養(yǎng)基的成分，用化學(xué)物質(zhì)模擬合成、人工設(shè)計(jì)、配制的培養(yǎng)基。最早開(kāi)發(fā)的基礎(chǔ)培養(yǎng)基（minimal essential medium, MEM），其本質(zhì)為含有鹽、氨基酸、維生素和其他必需營(yíng)養(yǎng)物的pH緩沖的等滲混合物。在此基礎(chǔ)上，DMEM、IMDM 、HAM F12、PRMI1640等各種合成細(xì)胞培養(yǎng)基被不斷開(kāi)發(fā)出來(lái)。常用合成培養(yǎng)基的配方此處不詳細(xì)介紹，其特性及應(yīng)用的范圍見(jiàn)表1-2。 表1-2 常用合成培養(yǎng)基的特性及應(yīng)用的范圍與天然培養(yǎng)基相比，有些天然的未知成分尚無(wú)法用已知的化學(xué)成分所替代，因此，細(xì)胞培養(yǎng)中使用合成培養(yǎng)基時(shí)必須加入一定量的天然培養(yǎng)基成分，以克服合成培養(yǎng)基的不足。最普遍的做法是添加5 ~ 10 %的血清，這樣才能維持細(xì)胞活力，促進(jìn)細(xì)胞增殖。針對(duì)不同的動(dòng)物細(xì)胞，現(xiàn)已開(kāi)發(fā)了多種商業(yè)化、個(gè)性化的低血清細(xì)胞培養(yǎng)基配方，營(yíng)養(yǎng)成份更加豐富，血清使用量可降低至1～3 %，由此可減少了血清等動(dòng)物來(lái)源成份對(duì)生物制品安全性的影響。1.4 無(wú)血清細(xì)胞培養(yǎng)基（serum free medium，SFM）經(jīng)歷了天然培養(yǎng)基、合成培養(yǎng)基后，無(wú)血清培養(yǎng)基和無(wú)血清培養(yǎng)成為當(dāng)今細(xì)胞培養(yǎng)領(lǐng)域的一大趨勢(shì)。采用無(wú)血清培養(yǎng)可降低生產(chǎn)成本，簡(jiǎn)化分離純化步驟，避免病毒污染造成的危害。無(wú)血清培養(yǎng)基，一般是在合成培養(yǎng)基的基礎(chǔ)上，加入成份完全明確的或部分明確的血清替代成份，達(dá)到既能滿足動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的要求，又能有效克服使用血清所帶來(lái)問(wèn)題的目的。無(wú)血清培養(yǎng)基中通常需要添加一些額外的組分，才能幫助細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)，包括以下幾大類(lèi)物質(zhì)：1）促貼壁物質(zhì)：一般為細(xì)胞外基質(zhì)，如纖連蛋白、層粘連蛋白等。它們還是重要的分裂素以及維持正常細(xì)胞功能的分化因子，對(duì)許多細(xì)胞的繁殖和分化，起著重要作用。纖連蛋白主要促進(jìn)來(lái)自中胚層細(xì)胞的貼壁與分化，這些細(xì)胞包括成纖維細(xì)胞、肉瘤細(xì)胞、粒細(xì)胞、腎上皮細(xì)胞、腎上腺皮質(zhì)細(xì)胞、CHO細(xì)胞、成肌細(xì)胞等。2）促生長(zhǎng)因子及激素：針對(duì)不同細(xì)胞添加不同的生長(zhǎng)因子。激素也是刺激細(xì)胞生長(zhǎng)、維持細(xì)胞功能的重要物質(zhì)，有些激素是許多細(xì)胞必不可少的，如胰島素。3）酶抑制劑：培養(yǎng)貼壁生長(zhǎng)的細(xì)胞，需要用胰酶消化傳代，在無(wú)血清培養(yǎng)基中需含酶抑制劑，以終止酶的消化作用，達(dá)到保護(hù)細(xì)胞的目的。最常用的是大豆胰酶抑制劑。4）結(jié)合蛋白和轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白：常見(jiàn)如轉(zhuǎn)鐵蛋白和牛血清白蛋白。牛血清白蛋白的添加量比較大，可增加培養(yǎng)基的粘度，保護(hù)細(xì)胞免受機(jī)械損傷。許多旋轉(zhuǎn)式培養(yǎng)的無(wú)血清培養(yǎng)基都含有牛血清白蛋白。5）微量元素：硒是最常見(jiàn)的。1.5 無(wú)蛋白無(wú)血清細(xì)胞培養(yǎng)基與化學(xué)組份限定無(wú)血清細(xì)胞培養(yǎng)基1）無(wú)蛋白無(wú)血清細(xì)胞培養(yǎng)基（protein free midium, PFM）這類(lèi)培養(yǎng)基完全不含有動(dòng)物來(lái)源蛋白，但仍有部份添加物是植物蛋白的小水解片段或合成多肽片段，以及類(lèi)固醇激素和脂類(lèi)前體等，以替代動(dòng)物激素、生長(zhǎng)因子的作用。其特點(diǎn)是完全沒(méi)有蛋白或蛋白含量極低，有利于生物制品的分離純化。2）化學(xué)組份限定無(wú)血清細(xì)胞培養(yǎng)基（Chemically defined media, CDM）此類(lèi)培養(yǎng)基是目前最安全、最為理想的無(wú)血清細(xì)胞培養(yǎng)基，所有成份的濃度都完全明確，即使其所添加的少量蛋白，也是可經(jīng)過(guò)純化處理，成份明確、濃度確定的蛋白。這類(lèi)培養(yǎng)基較為理想地減少了生產(chǎn)的可變性，提高了生產(chǎn)工藝的重復(fù)性，并有效降低了純化成本。1.6 個(gè)性化細(xì)胞培養(yǎng)基嚴(yán)格意義上來(lái)說(shuō)，個(gè)性化細(xì)胞培養(yǎng)基不在細(xì)胞培養(yǎng)基的傳統(tǒng)分類(lèi)之列，其具體是指一類(lèi)根據(jù)細(xì)胞特性、細(xì)胞培養(yǎng)工藝特點(diǎn)、使用者需求習(xí)慣而量身定制的細(xì)胞培養(yǎng)基，主要目的是提高細(xì)胞產(chǎn)率、產(chǎn)品質(zhì)量、產(chǎn)品安全性和降低血清的使用等。個(gè)性化細(xì)胞培養(yǎng)基可能是無(wú)血清培養(yǎng)基，也可能是低血清培養(yǎng)基，最終是為滿足某一種或某一類(lèi)生物制品的生產(chǎn)需求。2. 培養(yǎng)基的基本組分細(xì)胞培養(yǎng)基必須含有充分的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，才能滿足新細(xì)胞合成、細(xì)胞代謝等生化反應(yīng)所需要的物質(zhì)和能量。細(xì)胞培養(yǎng)基的主要成份是水、氨基酸、維生素、碳水化合物、無(wú)機(jī)鹽和其它一些輔助營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)等。此外，還可能含有血清、血清替代成分、pH指示劑等。2.1 水水是細(xì)胞的主要成份，也是細(xì)胞賴以生存的主要環(huán)境。細(xì)胞培養(yǎng)液中90 %以上的成份是水。細(xì)胞對(duì)水的品質(zhì)非常敏感，水的品質(zhì)將直接影響細(xì)胞培養(yǎng)的效果。而水中通常含有重金屬、氯、磷、有機(jī)物、熱原等污染物，細(xì)胞培養(yǎng)用水須經(jīng)過(guò)純化，品質(zhì)應(yīng)符合中國(guó)藥典注射用水標(biāo)準(zhǔn)或者超純水的標(biāo)準(zhǔn)。2.2 能源和碳源能源和碳源是用于維持細(xì)胞生命和支持細(xì)胞生長(zhǎng)，主要包括糖、糖酵解的產(chǎn)物和谷氨酰胺，其他氨基酸是次要的能源和碳源物質(zhì)。細(xì)胞能夠利用的糖類(lèi)主要是六碳糖，目前大多體外培養(yǎng)時(shí)選取葡萄糖作為細(xì)胞的主要碳源和能量來(lái)源，因此細(xì)胞培養(yǎng)基中基本都含有葡萄糖，含量一般為5～25 mmol/L。在葡萄糖濃度較高時(shí)，細(xì)胞主要通過(guò)擴(kuò)散作用吸收葡萄糖，細(xì)胞膜內(nèi)外的葡萄糖濃度梯度是細(xì)胞吸收葡萄糖的動(dòng)力；在葡萄糖濃度較低時(shí)，主要由鈉離子推動(dòng)的高親和性轉(zhuǎn)運(yùn)過(guò)程使細(xì)胞攝取葡萄糖。葡萄糖進(jìn)入細(xì)胞后參與糖酵解、核酸代謝、糖原合成、能量代謝以及一些氨基酸的合成。與體內(nèi)的能量供應(yīng)途徑不同，體外培養(yǎng)時(shí)，一定的濃度范圍條件下，葡萄糖主要經(jīng)糖酵解循環(huán)轉(zhuǎn)化成乳酸來(lái)為細(xì)胞提供能量。2.3 氮源（氨基酸）氨基酸在細(xì)胞內(nèi)的重要生理作用主要體現(xiàn)在以下幾個(gè)方面：① 是蛋白質(zhì)的基本組成單位，用于合成蛋白質(zhì)和多肽；② 可用于合成某些具有重要生理作用的含氮化合物，如核酸、尼克酰胺等；③ 某些氨基酸還具有獨(dú)特的生理作用，如甘氨酸參與生物轉(zhuǎn)化作用，丙氨酸和谷氨酰胺參與細(xì)胞內(nèi)氨的運(yùn)輸?shù)?；?可轉(zhuǎn)變成糖類(lèi)和脂肪，參與氧化供能。細(xì)胞所能利用的氨基酸是L型同分異構(gòu)體，D型氨基酸不能被利用。不同的細(xì)胞對(duì)氨基酸的需求各異，但有些必需氨基酸是細(xì)胞不能自身合成的，必須依靠外源的細(xì)胞培養(yǎng)液提供。其余非必需氨基酸，細(xì)胞可以自己合成，或通過(guò)轉(zhuǎn)氨作用由其他物質(zhì)轉(zhuǎn)化而來(lái)，但是在細(xì)胞培養(yǎng)基中添加適當(dāng)濃度的非必需氨基酸可以減輕細(xì)胞在合成方面的負(fù)擔(dān)，提高谷氨酰胺及其它必需氨基酸的利用率。絕大部分細(xì)胞對(duì)谷氨酰胺有較高的要求，可能因其不僅是細(xì)胞的主要氮源，且可作為細(xì)胞生長(zhǎng)的能源物質(zhì)和嘌呤、嘧啶核苷酸的前體，另外還可直接作為細(xì)胞增殖和產(chǎn)物合成中的蛋白質(zhì)和多肽的組成成分。在缺少谷氨酰胺時(shí)，細(xì)胞會(huì)生長(zhǎng)不良，甚至死亡。由于谷氨酰胺具有多種生理作用，體外動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)需要大量谷氨酰胺，利用量常超過(guò)其他必須氨基酸利用量的總和。2.4 維生素維生素是維持細(xì)胞生長(zhǎng)的生物活性物質(zhì)，在細(xì)胞代謝中起調(diào)節(jié)及控制作用。維生素可分為水溶性和脂溶性兩類(lèi)，水溶性維生素主要包括泛酸、維生素B12、葉酸、煙酰胺、吡哆醛、硫胺素、核黃素、維生素C、膽堿、肌醇等；脂溶性維生素主要包括維生素A、D、 E、K等；有的培養(yǎng)液中還直接采用ATP和輔酶A；大部分培養(yǎng)基中還有生物素。許多維生素參與構(gòu)成各種酶的活性基團(tuán)的成分，沒(méi)有它們，酶便沒(méi)有活性，代謝活動(dòng)將無(wú)法進(jìn)行。比如，泛酸可以在細(xì)胞內(nèi)轉(zhuǎn)變成?；d體蛋白和輔酶（如輔酶A），參與糖類(lèi)、脂類(lèi)和蛋白質(zhì)代謝中的催化反應(yīng)；維生素B12則在細(xì)胞內(nèi)參與葉酸的合成和脂肪酸的合成等。不同配方的細(xì)胞培養(yǎng)基中維生素的濃度有較大差異。例如，DMEM培養(yǎng)基中維生素的含量約為MEM培養(yǎng)基的兩倍，其原因是一方面不同種類(lèi)維生素的作用不同，另一方面不同種類(lèi)的細(xì)胞對(duì)維生素的需求也可能有較大差異，相應(yīng)細(xì)胞培養(yǎng)基的配方中維生素的含量也可能不同。2.5 無(wú)機(jī)鹽無(wú)機(jī)鹽是細(xì)胞維持生命活動(dòng)所不可缺少的營(yíng)養(yǎng)成分，主要有Na+、K+、Ca2+、Mg2+、Cl－、PO43—、SO42—、HCO3－等，主要作用為維持細(xì)胞培養(yǎng)液滲透壓平衡，參與細(xì)胞的代謝活動(dòng)。此外，通過(guò)提供鈉，K+和Ca2+，幫助細(xì)胞調(diào)節(jié)細(xì)胞膜功能。Na+是細(xì)胞外液中最主要的陽(yáng)離子，對(duì)維持滲透壓的恒定有決定性的作用，還與Cl－共同參與生物電活動(dòng)、維持水平衡和酸堿平衡等。K+主要分布在細(xì)胞內(nèi)液，對(duì)于激活某些酶是必需的，并在調(diào)節(jié)細(xì)胞內(nèi)環(huán)境的酸堿平衡上也有極重要意義。Ca2+和Mg2+主要參與信號(hào)傳導(dǎo)、能量代謝、脂肪酸合成、核糖體穩(wěn)定和蛋白質(zhì)合成等多種生理作用。PO43－、SO42－、HCO3－是基質(zhì)所需陰離子，同時(shí)是細(xì)胞內(nèi)電荷的調(diào)節(jié)者。磷對(duì)于細(xì)胞的生長(zhǎng)、代謝和調(diào)控都有重要的作用，含磷的化合物如核酸、磷脂、蛋白質(zhì)是構(gòu)成細(xì)胞的主要成分，ATP、ADP是能量生成、存儲(chǔ)和利用的不可或缺的化合物。上述離子對(duì)于細(xì)胞的作用各有不同，它們共同構(gòu)成了細(xì)胞賴以生存的滲透壓、pH和電化學(xué)平衡的微環(huán)境，細(xì)胞對(duì)于某種元素的吸收利用會(huì)受到其它元素的干擾，例如培養(yǎng)基中過(guò)高的鈣離子濃度會(huì)使鎂和鋅的吸收利用受到干擾。因此，在保證培養(yǎng)基中上述離子濃度滿足要求以外，還需保證上述離子之間種類(lèi)和比例的平衡。此外，微量元素如鐵、鈷、鎳、硒、碘、銅、鋅、錳、鉻、鉬、氟等對(duì)于細(xì)胞生長(zhǎng)代謝和產(chǎn)物合成都有促進(jìn)作用。微量元素在細(xì)胞內(nèi)通常以與有機(jī)物結(jié)合的形式存在。其中鐵在細(xì)胞中參與氧的轉(zhuǎn)運(yùn)；鈷是維生素B12的組成部分，參與葉酸的合成和脂肪酸的合成；鎳能夠激活脫氧核糖核酸酶、乙酰輔酶A合成酶等在細(xì)胞內(nèi)具有重要功能的酶，還具有穩(wěn)定核酸結(jié)構(gòu)的功能；亞硒酸鈉中的硒，作為谷胱甘肽過(guò)氧化物酶的輔基，具有抗過(guò)氧化物能力，參與消除細(xì)胞內(nèi)的脂肪酸過(guò)氧化物，提高細(xì)胞的生長(zhǎng)速率和活性。2.6 其他添加成分在低血清、無(wú)血清細(xì)胞培養(yǎng)基中，為滿足細(xì)胞生長(zhǎng)增殖需要，常常添加一些成份：蛋白質(zhì)、多肽、核苷、嘌呤、檸檬酸循環(huán)的中間產(chǎn)物、脂類(lèi)、及一些血清替代因子等。其中蛋白質(zhì)具有重要的作用，動(dòng)物細(xì)胞對(duì)許多物質(zhì)（難溶于水的離子或脂類(lèi)物質(zhì)）的攝取需要借助蛋白質(zhì)的傳遞作用，如白蛋白、傳遞蛋白、貼壁蛋白等能夠攜帶脂肪酸、激素、礦物質(zhì)等促進(jìn)細(xì)胞生長(zhǎng)。轉(zhuǎn)鐵蛋白是一種重要的傳遞蛋白，能夠結(jié)合鐵，促進(jìn)細(xì)胞對(duì)鐵離子的吸收，并具有解毒作用，其促生長(zhǎng)作用可能與其具有生長(zhǎng)因子的功能有關(guān)。胰島素可促進(jìn)細(xì)胞對(duì)葡萄糖和氨基酸的利用，商業(yè)化中一些生長(zhǎng)因子以重組蛋白形式添加到培養(yǎng)基中，主要用來(lái)刺激細(xì)胞增殖，并可促進(jìn)糖元和脂肪酸的合成。乙醇胺是一種重要的刺激細(xì)胞生長(zhǎng)的化合物，是腦磷酸的合成前提。另外，酚紅作為pH值的指示劑被加入到細(xì)胞培養(yǎng)基中。酚紅在產(chǎn)物純化過(guò)程中會(huì)造成干擾，并且具有一定的固醇類(lèi)激素樣作用，如雌激素樣作用。當(dāng)用于哺乳類(lèi)動(dòng)物細(xì)胞的培養(yǎng)，可能會(huì)發(fā)生一些固醇類(lèi)反應(yīng)?，F(xiàn)在商業(yè)化細(xì)胞培養(yǎng)基中的酚紅含量可根據(jù)需求調(diào)整。因生物反應(yīng)器具有pH在線檢測(cè)技術(shù)，生物反應(yīng)器培養(yǎng)動(dòng)物細(xì)胞時(shí)，酚紅可完全去除。2.7 保護(hù)劑細(xì)胞保護(hù)劑是保護(hù)細(xì)胞免受滲透壓變化、剪切力、氧化及氣泡作用等引起的損傷的物質(zhì)。在使用生物反應(yīng)器培養(yǎng)動(dòng)物細(xì)胞時(shí)，細(xì)胞易被機(jī)械攪拌和通氣鼓泡產(chǎn)生的流體剪切力和氣泡作用所傷害甚至破損死亡。為降低這種損傷，除優(yōu)化生物反應(yīng)器結(jié)構(gòu)和生產(chǎn)工藝外，可在細(xì)胞培養(yǎng)液中添加一些保護(hù)劑。其主要是通過(guò)改變細(xì)胞培養(yǎng)基物性或是對(duì)細(xì)胞具有保護(hù)作用的物質(zhì)，常用的種類(lèi)有血清、白蛋白、聚已二醇（PEG）、非離子性表面活性劑PluronicF68或是其他一些高分子聚合物等。3. 細(xì)胞培養(yǎng)基的理化性質(zhì)動(dòng)物細(xì)胞在細(xì)胞培養(yǎng)基中不僅能存活，還要分裂增殖，合適的滲透壓、pH值等理化性質(zhì)是細(xì)胞培養(yǎng)基必須具備的前提條件。3.1 pH動(dòng)物細(xì)胞大多數(shù)需要輕微的堿性條件，適宜pH在7.2～7.4之間。細(xì)胞培養(yǎng)基的pH值通常需經(jīng)校正的pH計(jì)來(lái)測(cè)定。在細(xì)胞生長(zhǎng)過(guò)程中，隨細(xì)胞數(shù)量的增多和代謝活動(dòng)的加強(qiáng)，二氧化碳不斷被釋放，培養(yǎng)液變酸，pH值發(fā)生變化。酚紅是細(xì)胞培養(yǎng)基中最常用的pH指示劑，但依靠細(xì)胞培養(yǎng)基中的酚紅等pH指示劑進(jìn)行判斷，需要實(shí)驗(yàn)員的經(jīng)驗(yàn)積累，存在較大的主觀性。實(shí)際上，個(gè)性化細(xì)胞培養(yǎng)基或是無(wú)血清細(xì)胞培養(yǎng)基中酚紅含量較少或是不含酚紅，只能通過(guò)pH計(jì)或者pH電極進(jìn)行pH值的檢測(cè)，結(jié)果更為準(zhǔn)確可靠。3.2 緩沖能力 細(xì)胞培養(yǎng)基應(yīng)具有一定的緩沖能力。細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中造成細(xì)胞培養(yǎng)液 pH 波動(dòng)的主要物質(zhì)是細(xì)胞代謝產(chǎn)生的CO2。在封閉式培養(yǎng)過(guò)程中CO2與水結(jié)合產(chǎn)生碳酸，細(xì)胞培養(yǎng)液pH 很快下降；打開(kāi)培養(yǎng)器具時(shí)CO2逸出則會(huì)引起pH升高。細(xì)胞培養(yǎng)基通常采用NaHCO3-CO2緩沖系統(tǒng)，按下列化學(xué)反應(yīng)方程式調(diào)節(jié)細(xì)胞培養(yǎng)基的pH值：H2O + CO2 → H2CO3 ? H+ + HCO3－NaHCO3 ? Na+ + HCO3－此外，還有緩沖能力較高的磷酸鹽緩沖系統(tǒng)。但碳酸鹽緩沖系統(tǒng)的細(xì)胞毒性小、成本低，在細(xì)胞培養(yǎng)中應(yīng)用得更為廣泛。另一種較為常用的緩沖液是HEPES（羥乙基哌嗪乙硫磺酸）液，它是一種非離子兩性緩沖液，在pH 7.0 ~ 7.2范圍內(nèi)具有較好的緩沖能力。高濃度的HEPES可能對(duì)細(xì)胞有毒性作用，細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)HEPES的添加濃度一般為10～25 mmol/L。3.3 滲透壓細(xì)胞必須生活在等滲的環(huán)境中，大多數(shù)體外培養(yǎng)的細(xì)胞對(duì)滲透壓有一定耐受性。研究顯示，對(duì)于大多數(shù)哺乳類(lèi)動(dòng)物細(xì)胞，滲透壓在260～320 mOsm/kg的范圍內(nèi)都適宜。在生產(chǎn)、配制細(xì)胞培養(yǎng)基的過(guò)程中，滲透壓的測(cè)定較為重要，有助于防止在生產(chǎn)、配制過(guò)程中出現(xiàn)稱量等方面的錯(cuò)誤。反應(yīng)器高密度培養(yǎng)動(dòng)物細(xì)胞過(guò)程，在添加碳酸氫鈉的過(guò)程中注意滲透壓的監(jiān)控，防止?jié)B透壓過(guò)高對(duì)細(xì)胞的損害。3.4 溫度溫度對(duì)細(xì)胞培養(yǎng)基有較大的影響，溫度過(guò)高可引起營(yíng)養(yǎng)成份的降解或破壞，細(xì)胞培養(yǎng)基的pH、離子強(qiáng)度和電解常數(shù)pKa也可能受到影響。如細(xì)胞培養(yǎng)液中的谷氨酰胺，在高溫條件下降解的速度較快，如35 ℃貯存時(shí)，放置3天降解25 %左右，在4 ℃貯存3周降解約20%。3.5 粘滯性及表面張力含血清細(xì)胞培養(yǎng)液的粘滯性主要是由血清引起的，在轉(zhuǎn)瓶培養(yǎng)貼壁細(xì)胞時(shí)，培養(yǎng)液的粘滯性對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)沒(méi)有多大影響；但在生物反應(yīng)器懸浮培養(yǎng)細(xì)胞時(shí)，細(xì)胞培養(yǎng)液的粘滯性則直接影響攪拌轉(zhuǎn)速控制及攪拌剪切力對(duì)細(xì)胞造成的損傷程度。表面張力對(duì)細(xì)胞培養(yǎng)有較大的作用，尤其在利用生物反應(yīng)器進(jìn)行懸浮培養(yǎng)時(shí)，攪拌和通氣都會(huì)引起泡沫的產(chǎn)生。對(duì)于含血清培養(yǎng)液，由于血清中多種蛋白的存在，攪拌時(shí)產(chǎn)生的氣泡較多，氣泡的上升運(yùn)動(dòng)對(duì)細(xì)胞的損傷程度還有爭(zhēng)議，但氣泡的破裂對(duì)細(xì)胞有明顯的損傷作用。為降低這種損傷，可通過(guò)在細(xì)胞培養(yǎng)基中添加一些保護(hù)劑，降低細(xì)胞-氣體和細(xì)胞-液體的表面張力，減少氣泡的形成。4. 細(xì)胞培養(yǎng)基的滅菌及儲(chǔ)存4.1不同細(xì)胞培養(yǎng)基的除菌方式及注意事項(xiàng)細(xì)胞培養(yǎng)基滅菌的方式分為高壓滅菌和膜過(guò)濾除菌，不同的培養(yǎng)基由于其營(yíng)養(yǎng)成份不同，滅菌方式也可能不同。① 高壓滅菌某些培養(yǎng)基（如MEM）可進(jìn)行高壓滅菌，這類(lèi)培養(yǎng)基一般不含有L-谷氨酰胺和碳酸氫鈉，一般是在培養(yǎng)基高壓滅菌后才加入。另外可用耐高壓的谷氨酸鹽（如L-丙氨酰-L-谷氨酰胺）代替L-谷氨酰胺。可高壓滅菌的培養(yǎng)基在121℃、15 psi，15分鐘的條件下完全可達(dá)到滅菌效果及營(yíng)養(yǎng)成分的最小損失，不需將滅菌時(shí)間延長(zhǎng)。絕大多數(shù)細(xì)胞培養(yǎng)基不適宜高壓滅菌。因培養(yǎng)液中常含有維生素、蛋白質(zhì)、多肽、生長(zhǎng)因子等物質(zhì)，這些物質(zhì)在高溫或射線照射下易發(fā)生變性或失去功能，因而上述液體多采用過(guò)濾消毒以除去細(xì)菌?？晒┻^(guò)濾滅菌使用的濾膜很多，其材料多為polyethersulphone（PES）、尼龍、多聚碳酸鹽、醋酸纖維素、硝酸纖維素、PTFE、陶瓷等。膜過(guò)濾除菌是當(dāng)前較為常用及便捷的一種方法，常采用0.2 μm孔徑的濾膜，部份采用0.1 μm孔徑。與高壓過(guò)濾方式相比，濾膜具有使用期限且價(jià)格較高，但對(duì)細(xì)胞培養(yǎng)基的營(yíng)養(yǎng)成份破壞性較小。4.2 不同細(xì)胞培養(yǎng)基存儲(chǔ)過(guò)程中的注意事項(xiàng)通常液體細(xì)胞培養(yǎng)基避免-20 ℃凍存，因?yàn)榻鈨鰰r(shí)可能會(huì)有營(yíng)養(yǎng)成份析出，影響培養(yǎng)效果。正常情況下于2 ~ 8 ℃避光保存，使用前從冰箱取出，放入室溫進(jìn)行平衡。通常的液體培養(yǎng)基有效期是6個(gè)月到12個(gè)月。液體細(xì)胞培養(yǎng)基盡量避免長(zhǎng)期貯存，其中的谷氨酰胺會(huì)隨著儲(chǔ)存時(shí)間的延長(zhǎng)而慢慢分解，如果細(xì)胞生長(zhǎng)不良，可考慮檢測(cè)培養(yǎng)基中的谷氨酰胺含量確定是否再補(bǔ)加谷氨酰胺。市售商業(yè)化液體細(xì)胞培養(yǎng)基有具體的有效期，對(duì)于使用干粉細(xì)胞培養(yǎng)基自行配制成液體以后，也應(yīng)低溫（2 ~ 8 ℃）貯存。除培養(yǎng)基中如谷氨酰胺易降解之外，培養(yǎng)基中的其他成份隨著溫度的升高也可能會(huì)發(fā)生降解或是析出。5. 細(xì)胞培養(yǎng)基使用過(guò)程中常見(jiàn)問(wèn)題分析5.1 細(xì)胞培養(yǎng)基的緩沖系統(tǒng)選擇及pH變化問(wèn)題 由于大多數(shù)細(xì)胞適宜的pH為7.0~7.4，偏離此范圍可能對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)產(chǎn)生有害的影響。但各種細(xì)胞對(duì)pH的要求也不完全相同，原代培養(yǎng)的細(xì)胞一般對(duì)pH變動(dòng)耐受力差，無(wú)限細(xì)胞系耐受力強(qiáng)。因此，原代培養(yǎng)時(shí)，培養(yǎng)液中的緩沖系統(tǒng)就顯得較為重要。一般的細(xì)胞培養(yǎng)基采用的都是平衡鹽系統(tǒng)，但不同的培養(yǎng)基或是同一系列的培養(yǎng)基所用平衡鹽系統(tǒng)不同，如199系列、MEM系列均有Hanks’系統(tǒng)的培養(yǎng)基及Earle’s系統(tǒng)的培養(yǎng)基。有些培養(yǎng)基不是上述常規(guī)的平衡鹽系統(tǒng)，例如RPMI1640培養(yǎng)基、F12培養(yǎng)基。MEM低血清培養(yǎng)基的平衡鹽系統(tǒng)也不是常規(guī)的平衡鹽系統(tǒng)，該平衡鹽系統(tǒng)的緩沖能力強(qiáng)于常規(guī)平衡鹽系統(tǒng)的緩沖能力。 細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中pH值下降產(chǎn)生的原因有很多。在細(xì)胞生長(zhǎng)非?？鞎r(shí)，pH值通常下降得很快，此時(shí)可以通過(guò)及時(shí)傳代、提高傳代比例或降低血清量等方法進(jìn)行解決。此外，培養(yǎng)瓶蓋擰得過(guò)緊、NaHCO3緩沖系統(tǒng)緩沖能力不夠、培養(yǎng)液中鹽濃度不正確、細(xì)菌、酵母或真菌污染等也能導(dǎo)致pH值通常下降得很快。這時(shí)，可以通過(guò)以下幾種方法解決： 1）增加培養(yǎng)液中NaHCO3濃度或減少培養(yǎng)箱內(nèi)CO2濃度。NaHCO3含量在2.0 g/L到3.7 g/L之間時(shí)對(duì)應(yīng)的CO2濃度為5~10%；2) 改用不依賴CO2培養(yǎng)液；3) 適當(dāng)松開(kāi)瓶蓋。在培養(yǎng)液中加HEPES緩沖液，使終濃度為10~25 mM；4) 在CO2培養(yǎng)環(huán)境中改用基于Earle’s鹽配制的培養(yǎng)液，在大氣培養(yǎng)環(huán)境中培養(yǎng)改用Hanks’鹽配制的培養(yǎng)液；5) 如果是污染造成的則丟棄培養(yǎng)物或用抗生素除菌。5.2 細(xì)胞培養(yǎng)基常用幾種重要的添加成份及使用過(guò)程中應(yīng)注意的問(wèn)題酚紅在細(xì)胞培養(yǎng)基中用作pH值的指示劑。一般情況下，可以通過(guò)酚紅的指示作用判斷培養(yǎng)基的pH值，但低血清或是無(wú)血清細(xì)胞培養(yǎng)基中酚紅的含量與普通細(xì)胞培養(yǎng)基中的酚紅含量不同，不能通過(guò)肉眼觀察或通過(guò)經(jīng)驗(yàn)來(lái)判定pH值，建議使用pH計(jì)進(jìn)行測(cè)定。酚紅通常對(duì)含血清的細(xì)胞培養(yǎng)基生產(chǎn)的生物制品質(zhì)量并不會(huì)產(chǎn)生明顯影響，也可通過(guò)純化技術(shù)去除，但酚紅在無(wú)血清細(xì)胞培養(yǎng)基中可能帶來(lái)胞內(nèi)鈉/鉀失衡，影響細(xì)胞生長(zhǎng)。碳酸氫鈉在細(xì)胞培養(yǎng)基中主要是作為緩沖系統(tǒng)，此外還具有調(diào)節(jié)滲透壓的作用。通常產(chǎn)品使用說(shuō)明中的碳酸氫鈉推薦量是一個(gè)標(biāo)準(zhǔn)、安全量，是在科學(xué)的基礎(chǔ)上根據(jù)實(shí)踐經(jīng)驗(yàn)所得。但是由于不同的細(xì)胞系（株）不同，同一株細(xì)胞適應(yīng)環(huán)境也可能不同（細(xì)胞耐受性不同等），且存在的地域性水質(zhì)差異等，在實(shí)際生產(chǎn)過(guò)程中也可稍作改動(dòng)，但使用者需做相應(yīng)的檢測(cè)（理化及細(xì)胞生產(chǎn)試驗(yàn)等）。HEPES是一種非離子緩沖液，在pH 7.2 ～7.4范圍內(nèi)具有較好的緩沖能力，在高濃度時(shí)對(duì)一些細(xì)胞可能有毒。HEPES緩沖液可與低水平的碳酸鈉（0.34 g /L）共用，以抵消因額外加入HEPES引起的滲透壓增加。其安全濃度范圍是10～25 mmol/L。丙酮酸鈉可以作為細(xì)胞培養(yǎng)中的替代碳源，盡管細(xì)胞更傾向于以葡萄糖作為碳源，但是在沒(méi)有葡萄糖的條件下，細(xì)胞也可以代謝丙酮酸鈉。谷氨酰胺在溶液中很不穩(wěn)定，4 ℃下放置1周可分解50 %，使用中最好單獨(dú)配制，置-20 ℃冰箱中保存，使用前加入細(xì)胞培養(yǎng)液中。原文：全面解讀細(xì)胞培養(yǎng)基！發(fā)布于 2020-09-27 14:25細(xì)胞生物學(xué)腫瘤細(xì)胞干細(xì)胞?贊同 165??9 條評(píng)論?分享?喜歡?收藏?申請(qǐng)轉(zhuǎn)載?文章被以下專(zhuān)欄收錄細(xì)胞培養(yǎng)俱樂(lè)部細(xì)胞技術(shù)維基
培養(yǎng)基的分類(lèi)，史上最全介紹（摘抄微生物培養(yǎng)基使用手冊(cè)）_medium_成分_瓊脂
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培養(yǎng)基的分類(lèi)，史上最全介紹（摘抄微生物培養(yǎng)基使用手冊(cè)）
2022-05-30 11:29
來(lái)源:
環(huán)凱微生物
發(fā)布于：廣東省
原標(biāo)題：培養(yǎng)基的分類(lèi)，史上最全介紹（摘抄微生物培養(yǎng)基使用手冊(cè)）
由于微生物的種類(lèi)繁多，對(duì)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的需求各不相同，所需要的培養(yǎng)基成分復(fù)雜，品種繁多，據(jù)不完全統(tǒng)計(jì)，目前常用的培養(yǎng)基約有1700余種，而且，隨著生物科學(xué)的發(fā)展，培養(yǎng)基的種類(lèi)也在不斷增加。培養(yǎng)基的分類(lèi)方法目前尚未統(tǒng)一，一般常按培養(yǎng)基的成分、物理狀態(tài)、用途等加以區(qū)分。
一、按成分分類(lèi)
1、天然培養(yǎng)基( native medium)
2、合成培養(yǎng)基(synthetic medium)
二、按形態(tài)分類(lèi)
1、液體培養(yǎng)基(liquid nutrient medium)
2、流體培養(yǎng)基(semi-liquid medium)
3、半固體培養(yǎng)基(half-solid medium)
4、固體培養(yǎng)基(solid medium)
三、按用途分類(lèi)
1、基礎(chǔ)培養(yǎng)基(basic media)
2、營(yíng)養(yǎng)培養(yǎng)基(nutrient media)
3、增菌培養(yǎng)基(enrichment media)
4、選擇性培養(yǎng)基(selective media)
5、鑒別培養(yǎng)基(differential media)
6、厭氧菌培養(yǎng)基(anaerobic media)
展開(kāi)全文
7、細(xì)胞培養(yǎng)液(liquid of culture cellulae)
一、按成分分類(lèi)
根據(jù)培養(yǎng)基的組成成分，可分為天然培養(yǎng)基和合成培養(yǎng)基兩大類(lèi)。
1、天然培養(yǎng)基(native medium) 含有不完全明了化學(xué)成分的天然物質(zhì)。如蛋白胨、牛肉膏(粉)、肉浸液、玉米漿、血液、馬鈴薯等。用此類(lèi)材料配成的培養(yǎng)基很難做到不同批號(hào)之間質(zhì)量的穩(wěn)定一致，因此在選用原料時(shí)務(wù)必注明其商品名稱、生產(chǎn)廠家及批號(hào)，對(duì)不同來(lái)源的原料應(yīng)先做小樣試驗(yàn)。此種培養(yǎng)基成本較低，細(xì)菌繁殖較好，一般細(xì)菌培養(yǎng)以選用天然培養(yǎng)基為主。
2、合成培養(yǎng)基(synthetic medium) 由已知化學(xué)成分的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)組成的培養(yǎng)基。根據(jù)微生物對(duì)營(yíng)養(yǎng)要求的不同，可完全由無(wú)機(jī)鹽或化合物組成，如：氨基酸、糖、嘌呤、嘧啶、維生素等，其組成成分已知，只要嚴(yán)格操作，各批次間質(zhì)量可做到穩(wěn)定一致。此培養(yǎng)基可用來(lái)檢測(cè)某種營(yíng)養(yǎng)物或藥物對(duì)微生物代謝的影響。組織細(xì)胞培養(yǎng)液均屬合成培養(yǎng)基。合成培養(yǎng)基的成本較高，其價(jià)格相當(dāng)于同類(lèi)天然培養(yǎng)基的幾倍以至于幾十倍。只含幾種無(wú)機(jī)鹽的合成培養(yǎng)基，僅適用于自養(yǎng)菌的培養(yǎng)，如培養(yǎng)亞硝化細(xì)菌、氧化硫桿菌等的培養(yǎng)基。有些培養(yǎng)基大部分成分為已知化學(xué)結(jié)構(gòu)的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，其中的個(gè)別或少數(shù)成分為未明化學(xué)成分的必須營(yíng)養(yǎng)物，成為半合成培養(yǎng)基，如百日咳菌苗生產(chǎn)用的水解酪素培養(yǎng)基。
二、按形態(tài)分類(lèi)
培養(yǎng)基按其不同的物理狀態(tài)，可分為液體、流體、半固體和固體4類(lèi)，培養(yǎng)基的物理狀態(tài)取決于培養(yǎng)基中是否加人凝固劑或凝固劑的加入量。
1、液體培養(yǎng)基(liquid nutrient medium) 不加任何凝固劑，常溫下以完全液態(tài)存在的培養(yǎng)基，如肉湯培養(yǎng)基或一般液體增菌培養(yǎng)基。
2、流體培養(yǎng)基(semi-liquid medium) 在液體培養(yǎng)基中加入0.05%~0.1%的瓊脂粉，使其具一定黏度，即成流體培養(yǎng)基。加入瓊脂粉增加了培養(yǎng)基的黏度，降低空氣中的氧氣進(jìn)人培養(yǎng)基的速度，能使培養(yǎng)基保持較長(zhǎng)時(shí)間的厭氧條件，有利于一般厭氧菌的生長(zhǎng)繁殖，如硫乙醇酸鹽培養(yǎng)基、改良馬丁培養(yǎng)基等。一般用于霉菌和厭氧菌檢查的液體培養(yǎng)基中可加人少量瓊脂使其成為流體培養(yǎng)。
3、半固體培養(yǎng)基(half-solid medium) 在液體培養(yǎng)基中加人0.2%~0.5%的瓊脂粉，加熱溶解后冷卻即成，以倒置不流動(dòng)的最軟狀態(tài)為宜，一般供細(xì)菌動(dòng)力試驗(yàn)、菌種傳代、保存和儲(chǔ)運(yùn)標(biāo)本之用。
4、固體培養(yǎng)基(solid medium) 培養(yǎng)基中含有足量的凝固劑(瓊脂粉>0.5%)，在常溫下能保持固體狀態(tài)。此類(lèi)培養(yǎng)基大都用于微生物的分離、純化、藥敏試驗(yàn)及菌苗制造。如營(yíng)養(yǎng)瓊脂、營(yíng)養(yǎng)斜面、SS瓊脂、TCBS瓊脂等。此外，還有一些特殊用途的培養(yǎng)基，如用血清或雞蛋做凝固劑配成的呂氏血清斜面培養(yǎng)基、雞蛋斜面培養(yǎng)基等。
三、按用途分類(lèi)
根據(jù)用途不同，培養(yǎng)基可分為基礎(chǔ)培養(yǎng)基、營(yíng)養(yǎng)培養(yǎng)基、增菌培養(yǎng)基、選擇性培養(yǎng)基、鑒別培養(yǎng)基、厭氧菌培養(yǎng)基等。
1、基礎(chǔ)培養(yǎng)基(basic media) 大多數(shù)微生物共同需要的營(yíng)養(yǎng)基礎(chǔ)。某--微生物如有特殊需要，可在此基礎(chǔ)上添加某種成分即可，如蛋白胨水、肉湯培養(yǎng)基、營(yíng)養(yǎng)瓊脂等。1%蛋白胨水培養(yǎng)基便是一個(gè)最簡(jiǎn)單的基礎(chǔ)培養(yǎng)基，該基礎(chǔ)培養(yǎng)基本身可供一般細(xì)菌增菌培養(yǎng)和靛基質(zhì)試驗(yàn)用，若再加入指示劑和糖類(lèi)，則配成糖發(fā)酵培養(yǎng)基，供糖發(fā)酵試驗(yàn)用，成為鑒別培養(yǎng)基；若在1%蛋白胨水中增加氯化鈉用量并將pH提高到8.6左右，則變成堿性蛋白胨水，用于霍亂弧菌的增菌培養(yǎng)，成為專(zhuān)用增菌培養(yǎng)基。
2、營(yíng)養(yǎng)培養(yǎng)基(nutrient media) 在基礎(chǔ)培養(yǎng)基中添加一些特殊的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，如葡萄糖、血液、血清、酵母浸膏、生長(zhǎng)因子等，可供營(yíng)養(yǎng)要求較高的細(xì)菌在其中生長(zhǎng)。例如鏈球菌、肺炎鏈球菌等需在含血液或血清的培養(yǎng)基中生長(zhǎng)；結(jié)核分枝桿菌的培養(yǎng)基中須添加雞蛋、馬鈴薯、甘油等。最常用的營(yíng)養(yǎng)培養(yǎng)基是血瓊脂平板。
3、增菌培養(yǎng)基(enrichment media) 一般為液體培養(yǎng)基，用于細(xì)菌的增菌培養(yǎng)，可泛用，也可專(zhuān)用，在專(zhuān)用增菌培養(yǎng)基中常含有目的菌生長(zhǎng)所需要的特殊營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)或生長(zhǎng)因子。
4、選擇性培養(yǎng)基(selective media) 選擇性培養(yǎng)基含有營(yíng)養(yǎng)物(增菌劑)和抑菌劑(選擇劑)，標(biāo)本接種于此類(lèi)培養(yǎng)基后，由于抑菌劑的選擇性抑制作用，使非目的菌受到不同程度的抑制，更有利于目的菌的增殖或分離。利用選擇性培養(yǎng)基經(jīng)過(guò)一定時(shí)間的增菌培養(yǎng)，再接種于選擇性鑒別培養(yǎng)基，可以提高目的菌的陽(yáng)性檢出率。抑菌劑的種類(lèi)很多，常用的有孔雀綠、燦爛綠、亞硒酸鈉、去氧膽酸鈉、膽鹽、四硫磺酸鈉、各種抗生素等。抑菌劑的加入量要適宜、準(zhǔn)確，有的劇毒，有的不耐高熱，配制時(shí)須特別注意。
5、鑒別培養(yǎng)基(differential media) 在培養(yǎng)基中加入某一反應(yīng)底物和指示劑，以區(qū)別某些微生物的特性從而鑒別之。又分一般鑒別培養(yǎng)基和選擇性鑒別培養(yǎng)基。只用于區(qū)別不同微生物種類(lèi)的培養(yǎng)基稱為-般鑒別培養(yǎng)基，此類(lèi)培養(yǎng)基中一般不加抑菌劑而只含指示劑，如克氏雙糖鐵培養(yǎng)基，含有葡萄糖及乳糖，以酚紅作為指示劑，觀察培養(yǎng)基底層與斜面的顏色變化判定細(xì)菌對(duì)葡萄糖和乳糖的發(fā)酵能力，加人檸檬酸鐵銨，培養(yǎng)后觀察是否產(chǎn)生黑色沉著以判定細(xì)菌是否分解蛋白胨中的含硫氨基酸而產(chǎn)生硫化氫；又如伊紅-美藍(lán)瓊脂，含有乳糖(反應(yīng)底物)、伊紅-美藍(lán)(指示劑)用以鑒別大腸埃希菌、腸道病原菌和其他雜菌。一般鑒別培養(yǎng)基的特點(diǎn)是在配方中都含有指示劑，并可用于區(qū)別不同種類(lèi)的微生物，有些鑒別培養(yǎng)基也可同時(shí)作為細(xì)菌的特殊需要用來(lái)分離培養(yǎng)某些細(xì)菌，如胰酪胨大豆瓊脂和巧克力色血瓊脂。
在培養(yǎng)基中加人某種抑制劑和指示劑，抑制某些細(xì)菌生長(zhǎng)，促進(jìn)目的菌的繁殖，并使所生長(zhǎng)的細(xì)菌菌落具有一定特征，以助鑒別挑選，這類(lèi)培養(yǎng)基稱為選擇性鑒別培養(yǎng)基。如SS瓊脂，在該培養(yǎng)基配方中含有乳糖(反應(yīng)底物)、中性紅和檸檬酸鐵銨(指示劑)、燦爛綠及膽鹽等(抑菌劑)。燦爛綠和膽鹽等抑菌劑能抑制革蘭氏陽(yáng)性菌及部分大腸埃希菌的生長(zhǎng)，而對(duì)沙門(mén)菌及志賀菌基本無(wú)影響，而且大腸埃希菌能發(fā)酵乳糖產(chǎn)酸，使菌落變紅色，沙門(mén)菌和志賀菌不發(fā)酵乳糖，其菌落為無(wú)色。如細(xì)菌產(chǎn)生硫化氫，則與檸檬酸鐵銨反應(yīng)生成硫化亞鐵沉淀，菌落中心呈黑色或褐色。以此達(dá)到鑒別的目的。
近年來(lái)，國(guó)內(nèi)外利用某些細(xì)菌特有的酶，選擇相應(yīng)的作用底物，研制出某些細(xì)菌專(zhuān)用的顯色培養(yǎng)基，用于細(xì)菌的分離鑒別，收到了良好的效果，這種顯色培養(yǎng)基實(shí)際上也是鑒別培養(yǎng)基。其基本原理是將色原(或熒光原)與細(xì)菌作用底物的結(jié)合物加于培養(yǎng)基中，當(dāng)細(xì)菌含有相應(yīng)酶時(shí)，使該結(jié)合物分解而顯色(或顯示熒光)。如色原糖苷結(jié)合物在糖苷酶作用下分解，使糖苷與色原分離，并顯示顏色；熒光氨基酸結(jié)合物(不顯熒光)在氨基肽酶作用下，使氨基酸與熒光物質(zhì)分離而顯示熒光。常用顯色的色原有α-萘酚、β-萘酚、鄰位硝基酚、對(duì)位硝基酚、對(duì)硝基苯胺、酚酞、2-氨基4-硝基苯等；常用的熒光物有4-甲基傘形酮(又稱7 -羥基4-甲基香豆素)等。目前，顯色培養(yǎng)基已用于多種細(xì)菌或真菌的分離鑒別培養(yǎng)，如沙門(mén)菌、大腸埃希菌、李斯特菌、雙歧桿菌和乳酸桿菌、白色念珠菌等顯色培養(yǎng)基。
還有一些鑒別性培養(yǎng)基，是利用細(xì)菌特有的各種酶系統(tǒng)，能分解利用各種特定的糖、醇、氨基酸或其他基質(zhì)而產(chǎn)酸、產(chǎn)氣、產(chǎn)堿或產(chǎn)生其他可見(jiàn)物質(zhì)，依此進(jìn)行細(xì)菌的鑒別，例如常用的生化培養(yǎng)基。
用于細(xì)菌生化特性試驗(yàn)的培養(yǎng)基特點(diǎn)是在無(wú)糖的基礎(chǔ)培養(yǎng)基中加人某種特定的基質(zhì)，并加人指示劑，細(xì)菌在此類(lèi)培養(yǎng)基中的一系列生化反應(yīng)結(jié)果，均通過(guò)指示劑最終顯示出來(lái)。此類(lèi)培養(yǎng)基為生化反應(yīng)鑒別培養(yǎng)基。根據(jù)用量又可分為常量生化培養(yǎng)基和微量生化培養(yǎng)基。值得注意的是生化試驗(yàn)培養(yǎng)基的某些成分受高溫、pH等諸多因素的影響，在配制和使用時(shí)，應(yīng)根據(jù)實(shí)際情況嚴(yán)格掌握，防止有效成分被破壞，以保障其使用效果。
6、厭氧菌培養(yǎng)基(anaerobic media) 供厭氧菌的分離、培養(yǎng)和鑒別用的培養(yǎng)基，稱為厭氧菌培養(yǎng)基。由于厭氧菌自身缺乏有氧代謝所必需的各種酶，如細(xì)胞色素和細(xì)胞色素氧化酶、過(guò)氧化氫酶和過(guò)氧化物酶、超氧化歧化酶，所以造成自身代謝的缺陷，無(wú)法進(jìn)行有氧代謝，而無(wú)氧酵解所產(chǎn)生的能量又不足，因此厭氧菌在正常的大氣環(huán)境下不能生長(zhǎng)和生存。為使厭氧菌能正常生長(zhǎng)，必須制備營(yíng)養(yǎng)成分豐富，氧化還原電勢(shì)較低，具有特殊生長(zhǎng)因子的專(zhuān)用培養(yǎng)基。
通常用心、腦或其他臟器浸液配制厭氧菌培養(yǎng)基，并常需加入硫乙醇酸鈉、半胱氨酸、肉渣、還原鐵、活性炭等還原劑或除氧材料。在液體培養(yǎng)基中還可加入刃天青或亞甲基藍(lán)作為氧化還原指示劑，以觀察培養(yǎng)基的含氧程度。心、腦浸液、肝塊、肉渣中含有不飽和脂肪酸，能吸收培養(yǎng)基中的氧。硫乙醇酸鈉、半胱氨酸是較強(qiáng)的還原劑，能消耗溶解在培養(yǎng)基中的氧。干燥的活性炭和脫脂棉同樣能吸收培養(yǎng)基中的氧。所以培養(yǎng)基中加入還原劑和吸收材料，目的都是為造成培養(yǎng)基的缺氧環(huán)境，使培養(yǎng)基保持較低的氧化還原電勢(shì)。此外，還可在培養(yǎng)基表面加一層液體石蠟，以隔絕培養(yǎng)基與大氣的接觸。
7、細(xì)胞培養(yǎng)液(liquid of culture cellulae) 是指用于各種目的的體外培養(yǎng)、保存、運(yùn)輸活組織、器官及細(xì)胞的液體，實(shí)質(zhì)為人工模擬體內(nèi)生長(zhǎng)的營(yíng)養(yǎng)環(huán)境，使細(xì)胞在此環(huán)境中有生長(zhǎng)和繁殖的能力。由于其成分?jǐn)?shù)量明確并可通過(guò)調(diào)節(jié)某一種成分來(lái)觀察被研究對(duì)象的各種生物學(xué)改變，被廣泛應(yīng)用于細(xì)胞生物學(xué)科的研究。細(xì)胞培養(yǎng)液的組成成分主要有水、氨基酸、維生素、碳水化合物、無(wú)機(jī)離子、生長(zhǎng)因子等，這些成分必須通過(guò)嚴(yán)格挑選，嚴(yán)格測(cè)試后方可使用，所用的水必須達(dá)到2級(jí)試驗(yàn)用水(CB/T 6682-1992)，所用的器皿必須清潔無(wú)污并進(jìn)行高壓滅菌或干烤去熱源處理。返回搜狐，查看更多
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Eagle在Eagle基本培養(yǎng)基（BEM）的基礎(chǔ)上發(fā)展而來(lái)的。MEM培養(yǎng)基僅含有12種必需氨基酸、谷氨酰胺和8種維生素，成分簡(jiǎn)單，主要用于貼壁細(xì)胞的培養(yǎng)，1959年修改配方，刪去賴氨酸、生物素，增加氨基酸濃度，配方修改后也可用于其他類(lèi)型細(xì)胞培養(yǎng)適合多種細(xì)胞單層生長(zhǎng)，是一種最基本、適用范圍最廣的培養(yǎng)基。因其營(yíng)養(yǎng)成分所限，針對(duì)生產(chǎn)之特定細(xì)胞培養(yǎng)與表達(dá)時(shí)，并不一定是使用效果最佳或者最經(jīng)濟(jì)的培養(yǎng)基。此外，MEM細(xì)胞培養(yǎng)基有含Earle's平衡鹽的類(lèi)型，也有含Hanks'平衡鹽的類(lèi)型；有高壓滅菌型的，也有過(guò)濾除菌型的；還有含非必需氨基酸的類(lèi)型。應(yīng)根據(jù)實(shí)際情況注意選擇合適的 MEM 細(xì)胞培養(yǎng)基M199細(xì)胞培養(yǎng)基1950 年由 Morgan 等設(shè)計(jì)，除 BSS 外，含有53 種成分添加適量的血清后，可廣泛用于多種細(xì)胞培養(yǎng)，可用于病毒學(xué)、疫苗生產(chǎn)以及大鼠胰腺上皮細(xì)胞和小鼠晶狀體組織的培養(yǎng)DMEM細(xì)胞培養(yǎng)基由Dulbecco改良的 Eagle 培養(yǎng)基，DMEM的氨基酸濃度是MEM的兩倍，維生素濃度是MEM的4倍，同時(shí)還增加了非必須氨基酸、微量鐵離子以及丙酮酸鈉。分低糖型（1000mg/L）、高糖型（4500mg/L）常用于雜交瘤的骨髓瘤細(xì)胞和 DNA 轉(zhuǎn)染的轉(zhuǎn)化細(xì)胞培養(yǎng)。例如 CHO 細(xì)胞表達(dá)生產(chǎn)乙肝疫苗、CHO 細(xì)胞表達(dá)EPOIMDM細(xì)胞培養(yǎng)基由Iscove's改良的Eagle培養(yǎng)基，IMDM培養(yǎng)基在DMEM培養(yǎng)基的基礎(chǔ)上添加了硒、HEPES、丙酮酸鈉以及額外的氨基酸和維生素，營(yíng)養(yǎng)非常豐富可用于雜交瘤細(xì)胞和高密度細(xì)胞的快速培養(yǎng)RPMI-1640細(xì)胞培養(yǎng)基Moore等人于1967年在Roswell Park Memorial Institute研制，針對(duì)淋巴細(xì)胞培養(yǎng)設(shè)計(jì)，BSS＋21種氨基酸＋維生素11種等成分廣泛應(yīng)用于各種正常細(xì)胞和癌細(xì)胞的培養(yǎng)，尤其是懸浮細(xì)胞的培養(yǎng)Ham's F10、F12細(xì)胞培養(yǎng)基1963年、1969年由Ham設(shè)計(jì)，含微量元素，Ham's F-12以Ham's F-10營(yíng)養(yǎng)混合物為基礎(chǔ)設(shè)計(jì)而成的，可在血清含量低時(shí)用F10適用于倉(cāng)鼠、人二倍體細(xì)胞，F(xiàn)12適用于CHO細(xì)胞。在低血清含量下時(shí)，特別適合單細(xì)胞培養(yǎng)和克隆化培養(yǎng)，添加血清后也廣泛應(yīng)用于癌細(xì)胞和原代細(xì)胞的培養(yǎng)，如大鼠肝細(xì)胞、大鼠前列腺上皮細(xì)胞、軟骨細(xì)胞、大鼠成肌細(xì)胞、雞胚胎細(xì)胞等DMEM/F12細(xì)胞培養(yǎng)基在DMEM培養(yǎng)基的基礎(chǔ)上，添加F12培養(yǎng)基中更為豐富的營(yíng)養(yǎng)成分，含有多種微量元素廣泛應(yīng)用于多種哺乳類(lèi)細(xì)胞的培養(yǎng)。同時(shí)，常作為開(kāi)發(fā)無(wú)血清培養(yǎng)基的基礎(chǔ)，也適用于低血清含量下哺乳動(dòng)物細(xì)胞的培養(yǎng)以及克隆密度培養(yǎng)McCoy's 5A培養(yǎng)基Thomas McCoy等人在1959年設(shè)計(jì)的培養(yǎng)基，最初專(zhuān)門(mén)用于Novikoff Hepatoma細(xì)胞的培養(yǎng)。McCoy's 5A培養(yǎng)基是改良的Basal Medium 5A，與其他培養(yǎng)基不同的是，McCoy's 5A含有還原型谷胱甘肽、細(xì)菌蛋白胨以及高濃度的葡萄糖McCoy's 5A廣泛用于多種類(lèi)型的原代細(xì)胞的培養(yǎng)，如骨髓、皮膚、牙齦、腎、脾、肺、大鼠胚胎、網(wǎng)膜等。此外McCoy's 5A培養(yǎng)基還用于組織活檢培養(yǎng)、細(xì)胞建系，以及一些淋巴細(xì)胞和較難培養(yǎng)的細(xì)胞的培養(yǎng)L15細(xì)胞培養(yǎng)基L-15培養(yǎng)基的緩沖系統(tǒng)由磷酸鹽和游離堿基氨基酸組成，代替了傳統(tǒng)的碳酸氫鈉緩沖系統(tǒng)，同時(shí)，用半乳糖和丙酮酸鈉代替葡萄糖可以防止酸性代謝副產(chǎn)物的形成，有助于維持培養(yǎng)液PH的穩(wěn)定，適合用于非CO2平衡環(huán)境的細(xì)胞培養(yǎng)L-15培養(yǎng)基適用于猴腎細(xì)胞和HEP-2的培養(yǎng)、原代（如胚胎和成人組織）細(xì)胞分離、多種病毒的培養(yǎng)以及神經(jīng)元的培養(yǎng)等完全培養(yǎng)基（CM）完全培養(yǎng)基是在基礎(chǔ)培養(yǎng)基中添加了血清、抗生素等物質(zhì)，也叫（血清）細(xì)胞培養(yǎng)基。其中大部分細(xì)胞培養(yǎng)常用的是牛血清，因?yàn)榕Ｑ逯泻写龠M(jìn)細(xì)胞增殖的各種生長(zhǎng)因子。此外為防止污染，培養(yǎng)液中尚需加一定量的抗生素。完全培養(yǎng)基根據(jù)添加血清量的多少，可分為細(xì)胞生長(zhǎng)培養(yǎng)基和細(xì)胞維持培養(yǎng)基，用于不同細(xì)胞和不同研究。無(wú)血清細(xì)胞培養(yǎng)基（SFM）無(wú)血清培養(yǎng)基是指在合成培養(yǎng)基的基礎(chǔ)上引入成分完全明確或部分明確的血清替代成分，主要是由基礎(chǔ)培養(yǎng)基和添加物（替代血清的補(bǔ)充因子）組成。其主要成分為下列幾種：黏附因子約有80%的細(xì)胞是屬于貼附型生長(zhǎng)。一般的細(xì)胞培養(yǎng)基是利用血清作為其來(lái)源，在無(wú)血清培養(yǎng)基中，細(xì)胞黏附因子就是很重要的物質(zhì)。生長(zhǎng)因子生長(zhǎng)因子是維持細(xì)胞活性與促進(jìn)細(xì)胞增生、遷移、分化等，不可或缺的要素。酶抑制劑貼附型細(xì)胞一般多以胰蛋白酶（trypsin）進(jìn)行傳代。在一般細(xì)胞培養(yǎng)中，血清中含有抑制trypsin的成分，所以無(wú)血清培養(yǎng)基必須添加trypsin抑制劑。細(xì)胞轉(zhuǎn)入無(wú)血清培養(yǎng)之前，要留有種子細(xì)胞，種子細(xì)胞按常規(guī)培養(yǎng)于含血清的培養(yǎng)基中，以保證細(xì)胞的特性不發(fā)生變化。優(yōu)點(diǎn)：01 未知組分少；02 避免血清對(duì)細(xì)胞的毒性作用和血清源性污染；03 雜蛋白含量少，避免血清成分影響研究結(jié)果或是產(chǎn)品制程，提高產(chǎn)品表達(dá)水平并易于純化。缺點(diǎn)：01 無(wú)血清培養(yǎng)基成本較高；02 不是所有的細(xì)胞都能在無(wú)血清培養(yǎng)基中培養(yǎng)；03 細(xì)胞在無(wú)血清培養(yǎng)基中易受某些機(jī)械因素和化學(xué)因素的影響，培養(yǎng)基保存和應(yīng)用方面局限性很大。二、細(xì)胞培養(yǎng)基的選擇細(xì)胞培養(yǎng)基的種類(lèi)很多，如何選擇適宜的培養(yǎng)基是細(xì)胞培養(yǎng)的關(guān)鍵。在此提供以下建議可供參考：01 如果是新購(gòu)買(mǎi)的細(xì)胞，可以向細(xì)胞株的廠家咨詢，或者詢問(wèn)引種來(lái)源查找細(xì)胞庫(kù)上對(duì)應(yīng)的培養(yǎng)基；02 根據(jù)細(xì)胞的特點(diǎn)及實(shí)驗(yàn)的需要來(lái)選擇培養(yǎng)基；03 自己試驗(yàn)，用多種培養(yǎng)基培養(yǎng)細(xì)胞，做生長(zhǎng)曲線，記錄細(xì)胞的生長(zhǎng)速度，觀察細(xì)胞的形態(tài)變化，根據(jù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果選擇最佳培養(yǎng)基。培養(yǎng)基種類(lèi)和細(xì)胞系并不是一個(gè)強(qiáng)制的對(duì)應(yīng)關(guān)系。具體培養(yǎng)細(xì)胞使用什么培養(yǎng)基，主要還是根據(jù)數(shù)據(jù)庫(kù)、文獻(xiàn)和經(jīng)驗(yàn)哦！發(fā)布于 2023-12-12 14:54?IP 屬地湖北細(xì)胞細(xì)胞培養(yǎng)基細(xì)胞培養(yǎng)?贊同 2??添加評(píng)論?分享?喜歡?收藏?申請(qǐng)轉(zhuǎn)載?文章被以下專(zhuān)欄收錄細(xì)
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細(xì)胞培養(yǎng) 中常用培養(yǎng)基及基本特性
1、RPMI-1640 Medium
RPMI-1640廣泛應(yīng)用于哺乳動(dòng)物 、特殊造血細(xì)胞、正常或惡性增生的白細(xì)胞，雜交瘤細(xì)胞的培養(yǎng)，是目前應(yīng)用十分廣泛的培養(yǎng)基。主要用于懸浮細(xì)胞培養(yǎng)。其它像K-562、HL-60、Jurkat、Daudi、IM-9等成淋巴細(xì)胞、T細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞以及HCT-15上皮細(xì)胞等均可參考使用。
2、Minimum Essential Medium(MEM)
也稱最低必需培養(yǎng)基，它僅含有12種必需氨基酸、谷氨酰胺和8種維生素。成分簡(jiǎn)單，可廣泛適應(yīng)各種已建成細(xì)胞系和不同地方的哺乳動(dòng)物細(xì)胞類(lèi)型的培養(yǎng)。MEM-Alpha一般用于培養(yǎng)一些難培養(yǎng)細(xì)胞類(lèi)型，而其它沒(méi)有特殊之處的細(xì)胞株則幾乎均可采用MEM來(lái)培養(yǎng)。
3、DMEM-高糖(標(biāo)準(zhǔn)型)是一種應(yīng)用十分廣泛的培養(yǎng)基，可用于許多哺乳動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng),更適合高密度懸浮細(xì)胞培養(yǎng)。適用于附著性較差，但又不希望它脫離原來(lái)生長(zhǎng)點(diǎn)的克隆培養(yǎng)，也可用于雜交瘤中骨髓瘤細(xì)胞和DNA轉(zhuǎn)染的轉(zhuǎn)化細(xì)胞的培養(yǎng)。
4、DMEM-低糖(標(biāo)準(zhǔn)型)是一種應(yīng)用十分廣泛的培養(yǎng)基，可用于許多哺乳動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)。低糖適于依賴性貼壁細(xì)胞培養(yǎng)，特別適用于生長(zhǎng)速度快、附著性較差的腫瘤細(xì)胞培養(yǎng)。
5、DMEM/F12
DMEM/F12培養(yǎng)基適于克隆密度的培養(yǎng)。F12培養(yǎng)基成分復(fù)雜，含有多種微量元素，和DMEM以1：1結(jié)合，稱為DMEM/F12培養(yǎng)基(DME/F12medium)，作為開(kāi)發(fā)無(wú)血清配方的基礎(chǔ)，以利用F12含有較豐富的成分和DMEM含有較高濃度的營(yíng)養(yǎng)成分為優(yōu)點(diǎn)。該培養(yǎng)基適用于血清含量較低條件下哺乳動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)。為了增強(qiáng)該培養(yǎng)基的緩沖能力，改良之一是在DMEM/F12(1：1)中加入15mMHEPES緩沖液。
6、McCoy’s 5A
McCoy’s 5A Medium 主要為肉瘤細(xì)胞的培養(yǎng)所設(shè)計(jì)，可支持多種(如骨髓、皮膚、肺和脾臟等)的原代移植物的生長(zhǎng)，除適于一般的原代細(xì)胞培養(yǎng)外，主要用于作組織活檢培養(yǎng)、一些淋巴細(xì)胞培養(yǎng)以及一些難培養(yǎng)細(xì)胞的生長(zhǎng)支持。例如Jensen大鼠肉瘤成纖維細(xì)胞、人淋巴細(xì)胞、HT-29、BHL-100等上皮細(xì)胞。
7、Iscove’s Modified Dulbecco Medium (IMDM)
Guilber 和Iscove將Dulbecco’Medium 改良為 Iscove’s Medium，用于培養(yǎng)紅細(xì)胞和巨噬細(xì)胞前體。此種培養(yǎng)液含有硒、額外的氨基酸和維生素、丙酮酸鈉和HEPES。并用硝酸鉀取代了硝酸鐵。IMDM還能夠促進(jìn)小鼠B淋巴細(xì)胞，LPS刺激的B細(xì)胞，骨髓造血細(xì)胞，T細(xì)胞和淋巴瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)。IMDM為營(yíng)養(yǎng)非常豐富的培養(yǎng)液，因此可以用于高密度細(xì)胞的快速增殖培養(yǎng)。
8、M-199 Medium
1950年，Morgan成功研制出具有確定化學(xué)成分的細(xì)胞培養(yǎng)液，即M-199，主要用于雞胚成纖維細(xì)胞培養(yǎng)。此培養(yǎng)液必須輔以血清才能支持長(zhǎng)期培養(yǎng)。M-199可用于培養(yǎng)多種種屬來(lái)源的細(xì)胞，并能培養(yǎng)轉(zhuǎn)染的細(xì)胞。
9、Leibovitz Medium (L-15)
L-15培養(yǎng)液適用于快速增殖瘤細(xì)胞的培養(yǎng)，用于在CO2缺乏的情況下培養(yǎng)腫瘤細(xì)胞株。此培養(yǎng)液采用磷酸鹽緩沖體系，氨基酸組成進(jìn)一步改良，并由半乳糖替代了葡萄糖。
10、Ham’s F-10培養(yǎng)基：適應(yīng)小鼠細(xì)胞、人類(lèi)二倍體的培養(yǎng)。
11、Ham’s F-12培養(yǎng)基：可以在加入很少血清的情況下應(yīng)用，特別適合單細(xì)胞培養(yǎng)和克隆化培養(yǎng)，是無(wú)血清培養(yǎng)中常用的基礎(chǔ)培養(yǎng)液。
12、William’s Medium E：用于大鼠肝上皮細(xì)胞的長(zhǎng)期細(xì)胞培養(yǎng)。
13、MCDB 131 培養(yǎng)液：用于培養(yǎng)內(nèi)皮細(xì)胞。
14、Opti-MEM I Reduced Serum Media：用于培養(yǎng)造血細(xì)胞。
15、植物血凝素(PHA)：增加細(xì)胞轉(zhuǎn)化和DNA合成。
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細(xì)胞污染 懸浮細(xì)胞復(fù)蘇后培養(yǎng)2.3天會(huì)出現(xiàn)小黑點(diǎn)，在倒置顯微鏡第四擋可見(jiàn)細(xì)菌在活動(dòng)。采用兩次離心，然后加平時(shí)雙倍量的抗生素，效果不佳。實(shí)驗(yàn)用的東西都重新高壓滅菌了，培養(yǎng)液也重新過(guò)濾了，個(gè)人操作也更加注意了，但仍然在復(fù)蘇后出現(xiàn)細(xì)菌，苦惱?。?！ ??35?評(píng)論
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如何選擇合適的細(xì)胞培養(yǎng)基？ - 知乎首頁(yè)知乎知學(xué)堂發(fā)現(xiàn)等你來(lái)答?切換模式登錄/注冊(cè)細(xì)胞細(xì)胞生物學(xué)微生物培養(yǎng)基如何選擇合適的細(xì)胞培養(yǎng)基？關(guān)注者11被瀏覽23,617關(guān)注問(wèn)題?寫(xiě)回答?邀請(qǐng)回答?好問(wèn)題?添加評(píng)論?分享?10 個(gè)回答默認(rèn)排序醫(yī)學(xué)科研小坑?山東農(nóng)業(yè)大學(xué) 遺傳學(xué)碩士? 關(guān)注關(guān)注公眾號(hào)“醫(yī)學(xué)科研小坑”，了解更多相關(guān)科研技術(shù)內(nèi)容！實(shí)驗(yàn)室新來(lái)了一個(gè)師弟，老板讓其從養(yǎng)細(xì)胞開(kāi)始。這個(gè)小師弟是個(gè)夜貓子，總喜歡深夜做實(shí)驗(yàn)。一天早上：小師弟：濕胸，昨天傳的細(xì)胞沒(méi)貼壁，培養(yǎng)液變成紫紅色的了。是不是你給我的那皿細(xì)胞是不好的？科研狗：你操作沒(méi)毛??？小師弟：絕對(duì)沒(méi)毛病，嚴(yán)格遵循你的指示。為了怕孵箱細(xì)胞太多，我特意單獨(dú)放在另外一個(gè)孵箱里?？蒲泄罚旱鹊龋硗庖粋€(gè)孵箱？沒(méi)有接通CO2啊今天我們來(lái)聊一聊培養(yǎng)液中的顏色，一般情況下，我們購(gòu)買(mǎi)回來(lái)的DMEM培養(yǎng)基都是鮮紅色的，如下圖：但是，作為老司機(jī)的你肯定也見(jiàn)過(guò)如下顏色的：還有這樣顏色的：小師弟：師兄，你見(jiàn)過(guò)赤橙黃露青藍(lán)紫的嗎？科研狗：...1. 為什么這個(gè)DMEM培養(yǎng)基是鮮紅色的？這個(gè)問(wèn)題可以從如下兩個(gè)方面來(lái)回答：業(yè)余回答：A 它總要有一個(gè)顏色吧，如果是綠色的或者你會(huì)問(wèn)他為什么是綠色的B 紅色的看上去有食欲，細(xì)胞自然喜歡吃了。你想想，給你一堆綠了吧唧的水果和給你一堆鮮紅的水果，你喜歡吃哪一種？專(zhuān)業(yè)回答：培養(yǎng)基的顏色主要是酚紅來(lái)顯示的，酚紅指示顏色非常靈敏，p值范圍為6-8，顏色由黃變?yōu)樽霞t。酚紅不是必須的，在有些情況下甚至是多余的，酚紅有類(lèi)似固醇類(lèi)激素的作用，如果涉及到固醇類(lèi)激素相關(guān)的細(xì)胞培養(yǎng)，最好不要添加。但是為了培養(yǎng)方便，能讓我們直觀地感覺(jué)培養(yǎng)液的狀況，加入酚紅后，如果培養(yǎng)液偏酸了，就顯示偏黃色，偏堿性了就顯示偏紫色。2. 為什么培養(yǎng)皿放在一個(gè)沒(méi)有開(kāi)啟CO2的孵箱里面，培養(yǎng)液顏色偏紫色？一般的DMEM使用的緩沖體系是NaHCO3， 初中的時(shí)候應(yīng)該見(jiàn)過(guò)如下的方程2NaHCO3=Na2CO3+CO2+H2O在沒(méi)有CO2的孵箱中，培養(yǎng)液中的CO2一直溢出，碳酸變少了，溶液變堿性了，就偏紫色了。同時(shí)我們打開(kāi)了很久的DMEM瓶里面的培養(yǎng)液也會(huì)慢慢偏紫色，也就是這個(gè)道理。 3. 什么時(shí)候溶液會(huì)變?yōu)辄S色？這個(gè)簡(jiǎn)單，一般污染細(xì)菌的時(shí)候或者長(zhǎng)時(shí)間不換液，溶液變?yōu)辄S色主要是酸性物質(zhì)太多，細(xì)菌和細(xì)胞過(guò)度增長(zhǎng)都會(huì)產(chǎn)生酸性物質(zhì)，溶液會(huì)變?yōu)辄S色。4. 培養(yǎng)基偏紫色了還能用不？可以將該偏紫色的培養(yǎng)基置于CO2孵箱中，擰松瓶蓋。一段時(shí)間之后你會(huì)發(fā)現(xiàn)顏色變?yōu)轷r紅色了，那么可以繼續(xù)接著用。但是不要使用過(guò)長(zhǎng)時(shí)間未用完并且變色的培養(yǎng)液，置于空氣下氧化之后培養(yǎng)基成分可能已發(fā)生了變化。5. 哪些情況下不得使用酚紅？如前面所說(shuō)的酚紅有類(lèi)似固醇類(lèi)激素的作用，如果涉及到固醇類(lèi)激素相關(guān)的細(xì)胞培養(yǎng)，不要添加。另外在做流式細(xì)胞的時(shí)候，酚紅會(huì)對(duì)結(jié)果產(chǎn)生影響，因此也不要添加。6. 有沒(méi)有不受CO2影響的培養(yǎng)基？有，如果緩沖體系不是NaHCO3，而是其他體系如HEPES，就不受CO2的影響。7. 常用的培養(yǎng)基有哪些？MEM（Minimum Essential Medium）: 也稱最低必須培養(yǎng)基，它僅含有12種必須氨基酸、谷氨酰胺和8種維生素?？梢詮V泛應(yīng)用到各種細(xì)胞培養(yǎng)。DMEM：分為高糖和低糖，碳酸氫鈉緩沖體系，所以需要CO2。高糖的適合于高密度懸浮細(xì)胞培養(yǎng)，適用于附著性較差，但又不希望它脫離原來(lái)生長(zhǎng)點(diǎn)的細(xì)胞。低糖的適合于生長(zhǎng)速度較快，附著性較差的腫瘤細(xì)胞培養(yǎng)。DMEM/F12：F12 培養(yǎng)基成分復(fù)雜，含有多種微量元素，和DMEM以1：1結(jié)合，稱為DMEM/F12培養(yǎng)基（DME/F12medium），作為開(kāi)發(fā)無(wú)血清配方的基礎(chǔ)，以利用F12含有較豐富成分和DMEM含有較高濃度的營(yíng)養(yǎng)成分為優(yōu)點(diǎn)。該培養(yǎng)基適用于血清含量較條件下哺乳動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)。RPMI-1640：主要用于懸浮細(xì)胞培養(yǎng)，廣泛用于哺乳物，特殊造血細(xì)胞，正?；蛘邜盒栽錾陌准?xì)胞，雜交瘤細(xì)胞。另外K-562， L-60、urkat、IM-9 等淋巴細(xì)胞、T細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞也可以使用。McCoy’s 5A : 主要用于肉瘤細(xì)胞的培養(yǎng)， 還可以用于骨髓、皮膚、肺等原代培養(yǎng)，用于作組織活檢培養(yǎng)、一些淋巴細(xì)胞培養(yǎng)以及一些難培養(yǎng)細(xì)胞的生長(zhǎng)支持。比如HT29，BHL100等上皮細(xì)胞。IMDM（Iscove’s Modified Dulbecco Medium）：主要用于紅細(xì)胞和巨噬細(xì)胞前體培養(yǎng)。培養(yǎng)液中含有微量元素硒以及額外的氨基酸和維生素、丙酮酸鈉以及HEPES。M199 Medium 是具有確定化學(xué)成分的細(xì)胞培養(yǎng)液，主要用于雞胚成纖維細(xì)胞培養(yǎng)，培養(yǎng)時(shí)必須輔助血清才能長(zhǎng)期培養(yǎng)。L-15(Leibovitz Medium) 適用于在CO2缺乏的情況下培養(yǎng)腫瘤細(xì)胞株，用于快速增值瘤細(xì)胞的培養(yǎng)。Ham’s F-10: 適用于小鼠細(xì)胞以及人的二倍體細(xì)胞的培養(yǎng)Ham’s F-12: 適用于單細(xì)胞培養(yǎng)或者克隆培養(yǎng)， 是無(wú)血清培養(yǎng)基中常用的基礎(chǔ)培養(yǎng)基。MCDB131：適用于培養(yǎng)內(nèi)皮細(xì)胞。Opti-MEM I Reduced Serum Media: 適用于培養(yǎng)造血細(xì)胞。本文轉(zhuǎn)自科研狗發(fā)布于 2022-08-27 22:17?贊同 7??添加評(píng)論?分享?收藏?喜歡收起?普諾賽生物? 關(guān)注細(xì)胞培養(yǎng)基既是培養(yǎng)細(xì)胞中供給細(xì)胞營(yíng)養(yǎng)和促使細(xì)胞生殖增殖的基礎(chǔ)物質(zhì)，也是培養(yǎng)細(xì)胞生長(zhǎng)和繁殖的生存環(huán)境。本期為大家整理了常見(jiàn)的細(xì)胞培養(yǎng)基種類(lèi)，接下來(lái)我們一起來(lái)了解一下這些培養(yǎng)基和適用的細(xì)胞類(lèi)型及選擇方法。一、常見(jiàn)的細(xì)胞培養(yǎng)基基礎(chǔ)培養(yǎng)基（MM）基礎(chǔ)細(xì)胞培養(yǎng)基主要成分是氨基酸、維生素、碳水化合物、無(wú)機(jī)鹽和其它一些輔助物質(zhì)。合成培養(yǎng)基使用時(shí)還需添加一定量的血清使細(xì)胞保持良好的生長(zhǎng)狀態(tài)。培養(yǎng)基的種類(lèi)有很多，其中DMEM、RPMI 1640、MEM、DMEM/F12是應(yīng)用較為廣泛的。其他如M199、IMDM、L15培養(yǎng)基等也用于某些細(xì)胞的培養(yǎng)。具體的特征及應(yīng)用如下：培養(yǎng)基特征應(yīng)用BME細(xì)胞培養(yǎng)基1955年Eagle設(shè)計(jì)，以BSS為基礎(chǔ)，添加8種維生素，13種氨基酸，成分簡(jiǎn)單、便于添加適于各種細(xì)胞系和特殊研究用，在此基礎(chǔ)上改良的細(xì)胞培養(yǎng)基品種有MEM、DMEM、IMDM等MEM細(xì)胞培養(yǎng)基由Harry Eagle在Eagle基本培養(yǎng)基（BEM）的基礎(chǔ)上發(fā)展而來(lái)的。MEM培養(yǎng)基僅含有12種必需氨基酸、谷氨酰胺和8種維生素，成分簡(jiǎn)單，主要用于貼壁細(xì)胞的培養(yǎng)，1959年修改配方，刪去賴氨酸、生物素，增加氨基酸濃度，配方修改后也可用于其他類(lèi)型細(xì)胞培養(yǎng)適合多種細(xì)胞單層生長(zhǎng)，是一種最基本、適用范圍最廣的培養(yǎng)基。因其營(yíng)養(yǎng)成分所限，針對(duì)生產(chǎn)之特定細(xì)胞培養(yǎng)與表達(dá)時(shí)，并不一定是使用效果最佳或者最經(jīng)濟(jì)的培養(yǎng)基。此外，MEM細(xì)胞培養(yǎng)基有含Earle's平衡鹽的類(lèi)型，也有含Hanks'平衡鹽的類(lèi)型；有高壓滅菌型的，也有過(guò)濾除菌型的；還有含非必需氨基酸的類(lèi)型。應(yīng)根據(jù)實(shí)際情況注意選擇合適的 MEM 細(xì)胞培養(yǎng)基M199細(xì)胞培養(yǎng)基1950 年由 Morgan 等設(shè)計(jì)，除 BSS 外，含有53 種成分添加適量的血清后，可廣泛用于多種細(xì)胞培養(yǎng)，可用于病毒學(xué)、疫苗生產(chǎn)以及大鼠胰腺上皮細(xì)胞和小鼠晶狀體組織的培養(yǎng)DMEM細(xì)胞培養(yǎng)基由Dulbecco改良的 Eagle 培養(yǎng)基，DMEM的氨基酸濃度是MEM的兩倍，維生素濃度是MEM的4倍，同時(shí)還增加了非必須氨基酸、微量鐵離子以及丙酮酸鈉。分低糖型（1000mg/L）、高糖型（4500mg/L）常用于雜交瘤的骨髓瘤細(xì)胞和 DNA 轉(zhuǎn)染的轉(zhuǎn)化細(xì)胞培養(yǎng)。例如 CHO 細(xì)胞表達(dá)生產(chǎn)乙肝疫苗、CHO 細(xì)胞表達(dá)EPOIMDM細(xì)胞培養(yǎng)基由Iscove's改良的Eagle培養(yǎng)基，IMDM培養(yǎng)基在DMEM培養(yǎng)基的基礎(chǔ)上添加了硒、HEPES、丙酮酸鈉以及額外的氨基酸和維生素，營(yíng)養(yǎng)非常豐富可用于雜交瘤細(xì)胞和高密度細(xì)胞的快速培養(yǎng)RPMI-1640細(xì)胞培養(yǎng)基Moore等人于1967年在Roswell Park Memorial Institute研制，針對(duì)淋巴細(xì)胞培養(yǎng)設(shè)計(jì)，BSS＋21種氨基酸＋維生素11種等成分廣泛應(yīng)用于各種正常細(xì)胞和癌細(xì)胞的培養(yǎng)，尤其是懸浮細(xì)胞的培養(yǎng)Ham's F10、F12細(xì)胞培養(yǎng)基1963年、1969年由Ham設(shè)計(jì)，含微量元素，Ham's F-12以Ham's F-10營(yíng)養(yǎng)混合物為基礎(chǔ)設(shè)計(jì)而成的，可在血清含量低時(shí)用F10適用于倉(cāng)鼠、人二倍體細(xì)胞，F(xiàn)12適用于CHO細(xì)胞。在低血清含量下時(shí)，特別適合單細(xì)胞培養(yǎng)和克隆化培養(yǎng)，添加血清后也廣泛應(yīng)用于癌細(xì)胞和原代細(xì)胞的培養(yǎng)，如大鼠肝細(xì)胞、大鼠前列腺上皮細(xì)胞、軟骨細(xì)胞、大鼠成肌細(xì)胞、雞胚胎細(xì)胞等DMEM/F12細(xì)胞培養(yǎng)基在DMEM培養(yǎng)基的基礎(chǔ)上，添加F12培養(yǎng)基中更為豐富的營(yíng)養(yǎng)成分，含有多種微量元素廣泛應(yīng)用于多種哺乳類(lèi)細(xì)胞的培養(yǎng)。同時(shí)，常作為開(kāi)發(fā)無(wú)血清培養(yǎng)基的基礎(chǔ)，也適用于低血清含量下哺乳動(dòng)物細(xì)胞的培養(yǎng)以及克隆密度培養(yǎng)McCoy's 5A培養(yǎng)基Thomas McCoy等人在1959年設(shè)計(jì)的培養(yǎng)基，最初專(zhuān)門(mén)用于Novikoff Hepatoma細(xì)胞的培養(yǎng)。McCoy's 5A培養(yǎng)基是改良的Basal Medium 5A，與其他培養(yǎng)基不同的是，McCoy's 5A含有還原型谷胱甘肽、細(xì)菌蛋白胨以及高濃度的葡萄糖McCoy's 5A廣泛用于多種類(lèi)型的原代細(xì)胞的培養(yǎng)，如骨髓、皮膚、牙齦、腎、脾、肺、大鼠胚胎、網(wǎng)膜等。此外McCoy's 5A培養(yǎng)基還用于組織活檢培養(yǎng)、細(xì)胞建系，以及一些淋巴細(xì)胞和較難培養(yǎng)的細(xì)胞的培養(yǎng)L15細(xì)胞培養(yǎng)基L-15培養(yǎng)基的緩沖系統(tǒng)由磷酸鹽和游離堿基氨基酸組成，代替了傳統(tǒng)的碳酸氫鈉緩沖系統(tǒng)，同時(shí)，用半乳糖和丙酮酸鈉代替葡萄糖可以防止酸性代謝副產(chǎn)物的形成，有助于維持培養(yǎng)液PH的穩(wěn)定，適合用于非CO2平衡環(huán)境的細(xì)胞培養(yǎng)L-15培養(yǎng)基適用于猴腎細(xì)胞和HEP-2的培養(yǎng)、原代（如胚胎和成人組織）細(xì)胞分離、多種病毒的培養(yǎng)以及神經(jīng)元的培養(yǎng)等完全培養(yǎng)基（CM）完全培養(yǎng)基是在基礎(chǔ)培養(yǎng)基中添加了血清、抗生素等物質(zhì)，也叫（血清）細(xì)胞培養(yǎng)基。其中大部分細(xì)胞培養(yǎng)常用的是牛血清，因?yàn)榕Ｑ逯泻写龠M(jìn)細(xì)胞增殖的各種生長(zhǎng)因子。此外為防止污染，培養(yǎng)液中尚需加一定量的抗生素。完全培養(yǎng)基根據(jù)添加血清量的多少，可分為細(xì)胞生長(zhǎng)培養(yǎng)基和細(xì)胞維持培養(yǎng)基，用于不同細(xì)胞和不同研究。無(wú)血清細(xì)胞培養(yǎng)基（SFM）無(wú)血清培養(yǎng)基是指在合成培養(yǎng)基的基礎(chǔ)上引入成分完全明確或部分明確的血清替代成分，主要是由基礎(chǔ)培養(yǎng)基和添加物（替代血清的補(bǔ)充因子）組成。其主要成分為下列幾種：黏附因子約有80%的細(xì)胞是屬于貼附型生長(zhǎng)。一般的細(xì)胞培養(yǎng)基是利用血清作為其來(lái)源，在無(wú)血清培養(yǎng)基中，細(xì)胞黏附因子就是很重要的物質(zhì)。生長(zhǎng)因子生長(zhǎng)因子是維持細(xì)胞活性與促進(jìn)細(xì)胞增生、遷移、分化等，不可或缺的要素。酶抑制劑貼附型細(xì)胞一般多以胰蛋白酶（trypsin）進(jìn)行傳代。在一般細(xì)胞培養(yǎng)中，血清中含有抑制trypsin的成分，所以無(wú)血清培養(yǎng)基必須添加trypsin抑制劑。細(xì)胞轉(zhuǎn)入無(wú)血清培養(yǎng)之前，要留有種子細(xì)胞，種子細(xì)胞按常規(guī)培養(yǎng)于含血清的培養(yǎng)基中，以保證細(xì)胞的特性不發(fā)生變化。優(yōu)點(diǎn)：01 未知組分少；02 避免血清對(duì)細(xì)胞的毒性作用和血清源性污染；03 雜蛋白含量少，避免血清成分影響研究結(jié)果或是產(chǎn)品制程，提高產(chǎn)品表達(dá)水平并易于純化。缺點(diǎn)：01 無(wú)血清培養(yǎng)基成本較高；02 不是所有的細(xì)胞都能在無(wú)血清培養(yǎng)基中培養(yǎng)；03 細(xì)胞在無(wú)血清培養(yǎng)基中易受某些機(jī)械因素和化學(xué)因素的影響，培養(yǎng)基保存和應(yīng)用方面局限性很大。二、細(xì)胞培養(yǎng)基的選擇細(xì)胞培養(yǎng)基的種類(lèi)很多，如何選擇適宜的培養(yǎng)基是細(xì)胞培養(yǎng)的關(guān)鍵。在此提供以下建議可供參考：01 如果是新購(gòu)買(mǎi)的細(xì)胞，可以向細(xì)胞株的廠家咨詢，或者詢問(wèn)引種來(lái)源查找細(xì)胞庫(kù)上對(duì)應(yīng)的培養(yǎng)基；02 根據(jù)細(xì)胞的特點(diǎn)及實(shí)驗(yàn)的需要來(lái)選擇培養(yǎng)基；03 自己試驗(yàn)，用多種培養(yǎng)基培養(yǎng)細(xì)胞，做生長(zhǎng)曲線，記錄細(xì)胞的生長(zhǎng)速度，觀察細(xì)胞的形態(tài)變化，根據(jù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果選擇最佳培養(yǎng)基。培養(yǎng)基種類(lèi)和細(xì)胞系并不是一個(gè)強(qiáng)制的對(duì)應(yīng)關(guān)系。具體培養(yǎng)細(xì)胞使用什么培養(yǎng)基，主要還是根據(jù)數(shù)據(jù)庫(kù)、文獻(xiàn)和經(jīng)驗(yàn)哦！發(fā)布于 2023-12-12 14:54?贊同 2??添加評(píng)論?分享?收藏?喜歡
細(xì)胞培養(yǎng)基的種類(lèi)有哪些？ - 知乎首頁(yè)知乎知學(xué)堂發(fā)現(xiàn)等你來(lái)答?切換模式登錄/注冊(cè)細(xì)胞細(xì)胞生物學(xué)微生物培養(yǎng)基細(xì)胞培養(yǎng)基的種類(lèi)有哪些？關(guān)注者9被瀏覽5,031關(guān)注問(wèn)題?寫(xiě)回答?邀請(qǐng)回答?好問(wèn)題?添加評(píng)論?分享?6 個(gè)回答默認(rèn)排序Dr.Whale??Texas A&M University PhD? 關(guān)注經(jīng)典的培養(yǎng)基有很多種，其中 DMEM、 RPMI 1640、 MEM 、 DMEM/F12 都是應(yīng)用最廣泛的培養(yǎng)基。其具體的特征及應(yīng)用如下：1）BME細(xì)胞培養(yǎng)基基礎(chǔ)Eagle培養(yǎng)基，BSS＋12種氨基酸＋谷氨酰胺＋8種維生素。簡(jiǎn)單、便于添加，適于各種傳代細(xì)胞系和特殊研究用。2）MEM細(xì)胞培養(yǎng)基又稱低限量Eagle培養(yǎng)基，在Eagle's基礎(chǔ)培養(yǎng)基（BME）上修改而來(lái)，刪去賴氨酸、生物素，氨基酸濃度增加，適合多種細(xì)胞單層生長(zhǎng)，有可高壓滅菌品種，是一種最基本、試用范圍最廣的培養(yǎng)基。3）DMEM細(xì)胞培養(yǎng)基分為低糖和高糖兩種。低糖適用于依賴性貼壁細(xì)胞培養(yǎng)，特別適用于生長(zhǎng)速度快、附著性較差的腫瘤細(xì)胞培養(yǎng)。高糖更適合高密度懸浮細(xì)胞培養(yǎng)，也適用于附著性較差，但又不希望它脫離原來(lái)生長(zhǎng)點(diǎn)的克隆培養(yǎng)，也可用于雜交瘤中骨髓瘤細(xì)胞和DNA轉(zhuǎn)染的轉(zhuǎn)化細(xì)胞的培養(yǎng)。例如CHO細(xì)胞表達(dá)生產(chǎn)乙肝疫苗、CHO細(xì)胞表達(dá)EPO。4）IMDM細(xì)胞培養(yǎng)基用于培養(yǎng)紅細(xì)胞和巨噬細(xì)胞前體。IMDM還能夠促進(jìn)小鼠B淋巴細(xì)胞，LPS刺激的B細(xì)胞，骨髓造血細(xì)胞，T細(xì)胞和淋巴瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)。5）RPMI-1640細(xì)胞培養(yǎng)基針對(duì)淋巴細(xì)胞培養(yǎng)設(shè)計(jì)，含BSS＋21種氨基酸＋維生素11種等?，F(xiàn)也用于懸浮細(xì)胞培養(yǎng)，如哺乳動(dòng)物、特殊造血細(xì)胞、正?；驉盒栽錾陌准?xì)胞，雜交瘤細(xì)胞的培養(yǎng)。6）HamF10細(xì)胞培養(yǎng)基1963年Ham設(shè)計(jì)，含微量元素，可在血清含量低時(shí)用，適用于克隆化培養(yǎng)。F10適用于倉(cāng)鼠、人二倍體細(xì)胞，特適于羊水細(xì)胞培養(yǎng)。7）DMEM/F12細(xì)胞培養(yǎng)基Ham's F12是為在低血清濃度下克隆CHO細(xì)胞而設(shè)計(jì)的，現(xiàn)在也廣泛應(yīng)用于克隆形成率的分析及原代培養(yǎng)。8）M199細(xì)胞培養(yǎng)基M-199可用于培養(yǎng)多種種屬來(lái)源的細(xì)胞，并能培養(yǎng)轉(zhuǎn)染的細(xì)胞?，F(xiàn)廣泛用于病毒學(xué)、疫苗生產(chǎn)。9）McCoy5A培養(yǎng)基MeCoy為肉瘤細(xì)胞設(shè)計(jì)，現(xiàn)可支持多種（如骨髓、皮膚、肺和脾臟等）的原代移植物的生長(zhǎng)。10）L15 細(xì)胞培養(yǎng)基L-15培養(yǎng)液適用于快速增殖瘤細(xì)胞的培養(yǎng)，用于在CO2缺乏的情況下培養(yǎng)腫瘤細(xì)胞株。此培養(yǎng)液采用磷酸鹽緩沖體系，氨基酸組成進(jìn)一步改良，并由半乳糖替代了葡萄糖。發(fā)布于 2022-06-22 15:42?贊同 3??添加評(píng)論?分享?收藏?喜歡收起?蘇州阿爾法生物?蘇州阿爾法生物實(shí)驗(yàn)器材有限公司 網(wǎng)絡(luò)推廣? 關(guān)注嘿，小伙伴，HEK293細(xì)胞咋養(yǎng)??？用啥培養(yǎng)基呀？哈哈，這個(gè)簡(jiǎn)單，毋庸置疑地告訴你，DMEM和RPMI都行啊！ HEK293細(xì)胞是廣泛應(yīng)用于科研領(lǐng)域的一種細(xì)胞模型，當(dāng)然要注意選用適合它們的培養(yǎng)基啦。妥妥地，你得選擇營(yíng)養(yǎng)豐富、含有充足生長(zhǎng)因子和營(yíng)養(yǎng)成分的培養(yǎng)基啊。DMEM和RPMI這兩個(gè)培養(yǎng)基都含有足夠的碳水化合物、氨基酸和維生素，供給細(xì)胞所需的能量和材料，保證細(xì)胞生長(zhǎng)和繁殖。HEK293細(xì)胞 這兩種培養(yǎng)基各有千秋??！DMEM培養(yǎng)基一般用于腫瘤細(xì)胞和無(wú)血清培養(yǎng)；而RPMI培養(yǎng)基則多用在白血細(xì)胞培養(yǎng)和腫瘤細(xì)胞等黏附生長(zhǎng)條件下的培養(yǎng)。 當(dāng)然，你也可以根據(jù)實(shí)驗(yàn)需求自己調(diào)制培養(yǎng)基哦。前提是要先知道HEK293細(xì)胞的營(yíng)養(yǎng)需求和培養(yǎng)條件，然后選擇合適的營(yíng)養(yǎng)成分和濃度以及添加生長(zhǎng)因子來(lái)制備培養(yǎng)基。自己調(diào)制培養(yǎng)基一方面可以節(jié)約成本，另一方面也可以盡量滿足實(shí)驗(yàn)要求，提高實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可靠性。 呀，童鞋們一定要注意培養(yǎng)基的配方和不同廠家之間的區(qū)別哦！前期試驗(yàn)時(shí)盡量先做一些小試驗(yàn)，評(píng)估培養(yǎng)基對(duì)HEK293細(xì)胞的影響，再在大規(guī)模培養(yǎng)時(shí)使用哦。同時(shí)也要關(guān)注HEK293細(xì)胞的生長(zhǎng)狀態(tài)和生理特點(diǎn)，及時(shí)調(diào)整培養(yǎng)基的配方和濃度，保證細(xì)胞的健康生長(zhǎng)。 總之，選對(duì)培養(yǎng)基對(duì)于HEK293細(xì)胞的生長(zhǎng)和實(shí)驗(yàn)結(jié)果至關(guān)重要！ 聽(tīng)說(shuō)你在尋找KEK293細(xì)胞及細(xì)胞培養(yǎng)基？別擔(dān)心，讓我們幫您解決這一煩惱吧！蘇州阿爾法生物除了有500多種腫瘤細(xì)胞，200多種基因編輯細(xì)胞外，還有細(xì)胞培養(yǎng)試劑、細(xì)胞培養(yǎng)耗材、實(shí)驗(yàn)耗材和 實(shí)驗(yàn)室儀器設(shè)備采購(gòu)。發(fā)布于 2023-05-10 14:26?贊同??添加評(píng)論?分享?收藏?喜歡
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細(xì)胞學(xué)堂 | 細(xì)胞培養(yǎng)基的種類(lèi)以及如何選擇
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? 一??常見(jiàn)的細(xì)胞培養(yǎng)基細(xì)胞培養(yǎng)基既是培養(yǎng)細(xì)胞中供給細(xì)胞營(yíng)養(yǎng)和促使細(xì)胞生殖增殖的基礎(chǔ)物質(zhì)，也是培養(yǎng)細(xì)胞生長(zhǎng)和繁殖的生存環(huán)境?；A(chǔ)培養(yǎng)基（MM）基礎(chǔ)細(xì)胞培養(yǎng)基主要成分是氨基酸、維生素、碳水化合物、無(wú)機(jī)鹽和其它一些輔助物質(zhì)。合成培養(yǎng)基使用時(shí)還需添加一定量的血清使細(xì)胞保持良好的生長(zhǎng)狀態(tài)。培養(yǎng)基的種類(lèi)有很多，其中DMEM、RPMI 1640、MEM、DMEM/F12是應(yīng)用較為廣泛的。其他如M199、IMDM、L15培養(yǎng)基等也用于某些細(xì)胞的培養(yǎng)。具體的特征及應(yīng)用如下：向上滑動(dòng)閱覽培養(yǎng)基特征應(yīng)用BME細(xì)胞培養(yǎng)基1955年Eagle設(shè)計(jì)，以BSS為基礎(chǔ)，添加8種維生素，13種氨基酸，成分簡(jiǎn)單、便于添加適于各種細(xì)胞系和特殊研究用，在此基礎(chǔ)上改良的細(xì)胞培養(yǎng)基品種有MEM、DMEM、IMDM等MEM細(xì)胞培養(yǎng)基由Harry Eagle在Eagle基本培養(yǎng)基（BEM）的基礎(chǔ)上發(fā)展而來(lái)的。MEM培養(yǎng)基僅含有12種必需氨基酸、谷氨酰胺和8種維生素，成分簡(jiǎn)單，主要用于貼壁細(xì)胞的培養(yǎng)，1959年修改配方，刪去賴氨酸、生物素，增加氨基酸濃度，配方修改后也可用于其他類(lèi)型細(xì)胞培養(yǎng)適合多種細(xì)胞單層生長(zhǎng)，是一種最基本、適用范圍最廣的培養(yǎng)基。因其營(yíng)養(yǎng)成分所限，針對(duì)生產(chǎn)之特定細(xì)胞培養(yǎng)與表達(dá)時(shí)，并不一定是使用效果最佳或者最經(jīng)濟(jì)的培養(yǎng)基。此外，MEM細(xì)胞培養(yǎng)基有含Earle's平衡鹽的類(lèi)型，也有含Hanks'平衡鹽的類(lèi)型；有高壓滅菌型的，也有過(guò)濾除菌型的；還有含非必需氨基酸的類(lèi)型。應(yīng)根據(jù)實(shí)際情況注意選擇合適的 MEM 細(xì)胞培養(yǎng)基M199細(xì)胞培養(yǎng)基1950 年由 Morgan 等設(shè)計(jì)，除 BSS 外，含有53 種成分添加適量的血清后，可廣泛用于多種細(xì)胞培養(yǎng)，可用于病毒學(xué)、疫苗生產(chǎn)以及大鼠胰腺上皮細(xì)胞和小鼠晶狀體組織的培養(yǎng)DMEM細(xì)胞培養(yǎng)基由Dulbecco改良的 Eagle 培養(yǎng)基，DMEM的氨基酸濃度是MEM的兩倍，維生素濃度是MEM的4倍，同時(shí)還增加了非必須氨基酸、微量鐵離子以及丙酮酸鈉。分低糖型（1000mg/L）、高糖型（4500mg/L）常用于雜交瘤的骨髓瘤細(xì)胞和 DNA 轉(zhuǎn)染的轉(zhuǎn)化細(xì)胞培養(yǎng)。例如 CHO 細(xì)胞表達(dá)生產(chǎn)乙肝疫苗、CHO 細(xì)胞表達(dá)EPOIMDM細(xì)胞培養(yǎng)基由Iscove's改良的Eagle培養(yǎng)基，IMDM培養(yǎng)基在DMEM培養(yǎng)基的基礎(chǔ)上添加了硒、HEPES、丙酮酸鈉以及額外的氨基酸和維生素，營(yíng)養(yǎng)非常豐富可用于雜交瘤細(xì)胞和高密度細(xì)胞的快速培養(yǎng)RPMI-1640細(xì)胞培養(yǎng)基Moore等人于1967年在Roswell Park Memorial Institute研制，針對(duì)淋巴細(xì)胞培養(yǎng)設(shè)計(jì)，BSS＋21種氨基酸＋維生素11種等成分廣泛應(yīng)用于各種正常細(xì)胞和癌細(xì)胞的培養(yǎng)，尤其是懸浮細(xì)胞的培養(yǎng)Ham's F10、F12細(xì)胞培養(yǎng)基1963年、1969年由Ham設(shè)計(jì)，含微量元素，Ham's F-12以Ham's F-10營(yíng)養(yǎng)混合物為基礎(chǔ)設(shè)計(jì)而成的，可在血清含量低時(shí)用F10適用于倉(cāng)鼠、人二倍體細(xì)胞，F(xiàn)12適用于CHO細(xì)胞。在低血清含量下時(shí)，特別適合單細(xì)胞培養(yǎng)和克隆化培養(yǎng)，添加血清后也廣泛應(yīng)用于癌細(xì)胞和原代細(xì)胞的培養(yǎng)，如大鼠肝細(xì)胞、大鼠前列腺上皮細(xì)胞、軟骨細(xì)胞、大鼠成肌細(xì)胞、雞胚胎細(xì)胞等DMEM/F12細(xì)胞培養(yǎng)基在DMEM培養(yǎng)基的基礎(chǔ)上，添加F12培養(yǎng)基中更為豐富的營(yíng)養(yǎng)成分，含有多種微量元素廣泛應(yīng)用于多種哺乳類(lèi)細(xì)胞的培養(yǎng)。同時(shí)，常作為開(kāi)發(fā)無(wú)血清培養(yǎng)基的基礎(chǔ)，也適用于低血清含量下哺乳動(dòng)物細(xì)胞的培養(yǎng)以及克隆密度培養(yǎng)McCoy's 5A培養(yǎng)基Thomas McCoy等人在1959年設(shè)計(jì)的培養(yǎng)基，最初專(zhuān)門(mén)用于Novikoff Hepatoma細(xì)胞的培養(yǎng)。McCoy's 5A培養(yǎng)基是改良的Basal Medium 5A，與其他培養(yǎng)基不同的是，McCoy's 5A含有還原型谷胱甘肽、細(xì)菌蛋白胨以及高濃度的葡萄糖McCoy's 5A廣泛用于多種類(lèi)型的原代細(xì)胞的培養(yǎng)，如骨髓、皮膚、牙齦、腎、脾、肺、大鼠胚胎、網(wǎng)膜等。此外McCoy's 5A培養(yǎng)基還用于組織活檢培養(yǎng)、細(xì)胞建系，以及一些淋巴細(xì)胞和較難培養(yǎng)的細(xì)胞的培養(yǎng)L15細(xì)胞培養(yǎng)基L-15培養(yǎng)基的緩沖系統(tǒng)由磷酸鹽和游離堿基氨基酸組成，代替了傳統(tǒng)的碳酸氫鈉緩沖系統(tǒng)，同時(shí)，用半乳糖和丙酮酸鈉代替葡萄糖可以防止酸性代謝副產(chǎn)物的形成，有助于維持培養(yǎng)液PH的穩(wěn)定，適合用于非CO2平衡環(huán)境的細(xì)胞培養(yǎng)L-15培養(yǎng)基適用于猴腎細(xì)胞和HEP-2的培養(yǎng)、原代（如胚胎和成人組織）細(xì)胞分離、多種病毒的培養(yǎng)以及神經(jīng)元的培養(yǎng)等完全培養(yǎng)基（CM）完全培養(yǎng)基是在基礎(chǔ)培養(yǎng)基中添加了血清、抗生素等物質(zhì)，也叫（血清）細(xì)胞培養(yǎng)基。其中大部分細(xì)胞培養(yǎng)常用的是牛血清，因?yàn)榕Ｑ逯泻写龠M(jìn)細(xì)胞增殖的各種生長(zhǎng)因子。此外為防止污染，培養(yǎng)液中尚需加一定量的抗生素。完全培養(yǎng)基根據(jù)添加血清量的多少，可分為細(xì)胞生長(zhǎng)培養(yǎng)基和細(xì)胞維持培養(yǎng)基，用于不同細(xì)胞和不同研究。無(wú)血清細(xì)胞培養(yǎng)基（SFM）無(wú)血清培養(yǎng)基是指在合成培養(yǎng)基的基礎(chǔ)上引入成分完全明確或部分明確的血清替代成分，主要是由基礎(chǔ)培養(yǎng)基和添加物（替代血清的補(bǔ)充因子）組成。其主要成分為下列幾種：黏附因子約有80%的細(xì)胞是屬于貼附型生長(zhǎng)。一般的細(xì)胞培養(yǎng)基是利用血清作為其來(lái)源，在無(wú)血清培養(yǎng)基中，細(xì)胞黏附因子就是很重要的物質(zhì)。生長(zhǎng)因子生長(zhǎng)因子是維持細(xì)胞活性與促進(jìn)細(xì)胞增生、遷移、分化等，不可或缺的要素。酶抑制劑貼附型細(xì)胞一般多以胰蛋白酶（trypsin）進(jìn)行傳代。在一般細(xì)胞培養(yǎng)中，血清中含有抑制trypsin的成分，所以無(wú)血清培養(yǎng)基必須添加trypsin抑制劑。細(xì)胞轉(zhuǎn)入無(wú)血清培養(yǎng)之前，要留有種子細(xì)胞，種子細(xì)胞按常規(guī)培養(yǎng)于含血清的培養(yǎng)基中，以保證細(xì)胞的特性不發(fā)生變化。優(yōu)點(diǎn)1未知組分少；2避免血清對(duì)細(xì)胞的毒性作用和血清源性污染；3雜蛋白含量少，避免血清成分影響研究結(jié)果或是產(chǎn)品制程，提高產(chǎn)品表達(dá)水平并易于純化。缺點(diǎn)1無(wú)血清培養(yǎng)基成本較高；2不是所有的細(xì)胞都能在無(wú)血清培養(yǎng)基中培養(yǎng)；3細(xì)胞在無(wú)血清培養(yǎng)基中易受某些機(jī)械因素和化學(xué)因素的影響，培養(yǎng)基保存和應(yīng)用方面局限性很大。二細(xì)胞培養(yǎng)基的選擇細(xì)胞培養(yǎng)基的種類(lèi)很多，如何選擇適宜的培養(yǎng)基是細(xì)胞培養(yǎng)的關(guān)鍵。在此提供以下建議可供參考：1如果是新購(gòu)買(mǎi)的細(xì)胞，可以向細(xì)胞株的廠家咨詢，或者詢問(wèn)引種來(lái)源查找細(xì)胞庫(kù)上對(duì)應(yīng)的培養(yǎng)基；2根據(jù)細(xì)胞的特點(diǎn)及實(shí)驗(yàn)的需要來(lái)選擇培養(yǎng)基；3自己試驗(yàn)，用多種培養(yǎng)基培養(yǎng)細(xì)胞，做生長(zhǎng)曲線，記錄細(xì)胞的生長(zhǎng)速度，觀察細(xì)胞的形態(tài)變化，根據(jù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果選擇最佳培養(yǎng)基。培養(yǎng)基種類(lèi)和細(xì)胞系并不是一個(gè)強(qiáng)制的對(duì)應(yīng)關(guān)系。具體培養(yǎng)細(xì)胞使用什么培養(yǎng)基，主要還是根據(jù)數(shù)據(jù)庫(kù)、文獻(xiàn)和經(jīng)驗(yàn)哦！
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